薄荷有效物质基础研究

【作者】 刘颖；

【导师】 石任兵； 张兰珍；

【作者基本信息】 北京中医药大学 ， 中药化学， 2005， 硕士

【摘要】 薄荷为唇形科植物薄荷 Mentha haplocalyx Briq.的干燥地上部分。为传统的辛凉解表药,全国大部分地区皆有种植,江苏等地为主要产区,味辛,性凉 ,具有疏风、散热、疏肝、辟秽、解毒的功效。用于外感风热、头痛目赤、咽喉肿痛、食滞气胀、口疮、牙痛、疮疥等症的治疗。同时,薄荷也是中药复方银翘散的组成药物。从银翘散的方源及其制方原则,结合药物的效用与抗病毒活性考察,薄荷为银翘散抗流感病毒的主要药物,且酚类成分为其主要的有效部位。 本论文分三部分,对薄荷有效物质基础进行了研究。 第一部分 薄荷文献综述。对薄荷的化学成分及生物活性进行综述,共引用文献57 篇。 第二部分 薄荷的实验研究 1 建立了薄荷有效部位的制备方法。首先优化了薄荷有效部位的提取方法。以薄荷中所含酚类及醉鱼草苷为指标,对薄荷进行提取工艺考察,经数据分析,以酚类为指标进行测定,薄荷有效部位提取的最佳工艺条件为:A1%乙醇回流提取 B3次,每次 C3 小时,溶剂用量为 D1 倍。以醉鱼草苷为指标进行测定,薄荷有效部位提取的最佳工艺条件为:A1%乙醇回流提取 B3次,每次 C1小时,溶剂用量为 D1倍。两结果只在提取时间上稍有不同,基本一致,因此确定薄荷有效部位提取的最佳工艺条件为:A1%乙醇回流提取 B3次,每次 C3小时,溶剂用量为 D1倍。同时优化了大孔吸附树脂分离富集方法。以总酚类及醉鱼草苷为指标,对树脂类型进行筛选,通过测定 5 种吸附树脂对总酚类及醉鱼草苷的吸附特性,综合考虑多方面因素,树脂A 对薄荷有效部位中总酚类及醉鱼草苷吸附量大,解吸容易,吸附后浸膏含量高,是一种性能良好的薄荷有效部位的吸附剂。同时通过对树脂 A 应用工艺的研究,对其进行洗脱剂,上样量与树脂量的最佳比值,柱床径高比,上样液浓度,吸附流速,洗脱流速,洗脱体积等参数的考察,确定最佳树脂分离富集方法为:上样量与树脂量最佳比值为 1:5,洗脱剂为 I2%乙醇,d/L 为 L1的柱子,上样液浓度为 K2g/mL(相当于生药量),用G2mL/min的流速进行吸附,选择M2mL/min的流速洗脱10 BV。其方法简便,得率较高,可推广应用于生产。 2 阐明了薄荷有效部位的主要化学成分。对薄荷有效部位进行提取、分离,得到13 个单体化合物,运用各种色谱、光谱(包括 UV、IR、EI-MS、1H-NMR、13C-NMR)技术及化学方法鉴定了其中的 12 个。其中甾醇 1 个,为 β-谷甾醇。蒽醌类 4 个,分别是大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。黄酮类 3 个,分别为 5,6,4′-三羟基-7,8-二甲氧基黄酮、5,6,4′三羟基-7,8,3′-三甲氧基黄酮、醉鱼草苷。有机酸 3 个,分别为苯甲酸、反式桂皮酸、迷迭香酸。单萜一个,为 2-羟基-对-薄荷烷-1,4(8)-二烯-3-酮。鉴定的 12 个化合物均为首次从薄荷有效部位中分离得到。 3 采用可见分光光度法首次对薄荷有效部位中总酚类成分的含量进行了测定,并用从其有效部位中分离得到的具有代表性的成分迷迭香酸进行定量分析。结果以迷2 薄荷有效物质基础研究迭香酸为指标性成分分析,其回归方程为 y=0.0444x-0.0016,r=0.9999(n=5),表明迷迭香酸在 3.16-22.12μg/mL 的浓度范围之间与吸收度呈良好的线性关系。经测定,以迷迭香酸为指标性成分,有效部位总酚类成分平均含量为 37.33%,RSD 为 1.78%,加样回收率为 99.93%,RSD 为 1.70%。4 建立了薄荷有效部位中的主要指标性成分醉鱼草苷、和含量较高的迷迭香酸的HPLC 分 析 方 法 , 并 对 样 品 进 行 了 含 量 测 定 。 醉 鱼 草 苷 回 归 方 程 为y=857090x-1863.8,r=0.9999(n=5)。表明醉鱼草苷在 0.216-0.648μg 范围内与其色谱峰峰面积呈良好的线性关系。计算得薄荷有效部位中醉鱼草苷平均含量为 3.58%,RSD 为 1.99%,加样回收率为 100.20%,RSD 为 1.98%;迷迭香酸回归方程为y=2.74E-07x+3.69E-03,r=0.9999(n=5)。表明迷迭香酸在 0.064-0.576μg 范围内与其色谱峰峰面积呈良好的线性关系。计算得薄荷有效部位中迷迭香酸平均含量为6.37%,RSD 为 0.72%,加样回收率为 100.59%,RSD 为 2.19%第三部分 对各实验结果进行分析讨论主题词:薄荷; 化学成分; 提取分离; 定量分析更多还原

【Abstract】 The effective fractions of Mentha haplocalyx Briq. are founded to be able toanti-influenza virus.The dissertation divides into three parts to study the material of anti-influenza virus ofMentha haplocalyx Briq.Part one: Literature and summarizations about Mentha haplocalyx Briq.It sums respectively up the pharmacy, pharmacology of Mentha haplocalyx Briq.,57references are cited.Part two: experiment studies about Mentha haplocalyx Briq.One: The observation of the extracted term of Mentha haplocalyx Briq. with theevaluation quota of the amount of the total phenols and linarin give the result that thebest extracted term is: The drug is extracted by A1% alcohol for B3 times,each time D1times A1% alcohol and C3 hour. Observing the absorption faction with the evaluation quota of the amount of thetotal phenols and linarin of Mentha haplocalyx Briq. on the five kinds of macroabsorption resin. We reach the conclusion that the A resin is the best macro absorptionresin which has the best effect on the separation of the total phenols and linarin ofMentha haplocalyx Briq. and the best technology term , the best technology term is thatK2g/mL density(equal to the raw herbs) of the extraction substance is passes the macroporous resin column of d/L is L1 with the G2 mL/min absorbed speed, and water is usedas elution. Then elute it with I2 % alcohol for ten times of resin column with the M2mL/min eluted speed. This menthod is simple and we can put it into practice.Two: The effects of anti-influenza virus from Mentha haplocalyx Briq. are extracted and separated. 13 compounds are isolated with silica gel , sephadex gel ,toyopearl gel chromatography and 12 compounds are identified with UV, EI-MS,1H-NMR,13C-NMR. They are one sterol (|?-sitosterol) , four anthraquinones (chrys-ophanol, physcion , emodin, aloemodin), three organic acid (benzoic acid, trans-cinnamic acid, rosmarinic acid ) three flavonoids (5,6,4??-trihydroxy-7,8-dimethoxyf-lavone, linarin ,5,6,4??-trihydroxy-7,8,3??-trimethoxyflavone,), one monoterpenoids ( 2-hydroxy-|?-mentha-1,4(8)-dien-3-one). All of the 12 compounds are firstly obtained from the effective fractions of Mentha haplocalyx Briq..Three : The total phenols contents in the effects of anti-influenza virus from Menthahaplocalyx Briq. are determined with the evaluation quota of rosmarinic acid. Thecalibration curve are linear at ranges of 3.16-22.12|ìg/mL (r=0.9999).The averagerecoveries are 99.93%(RSD 1.70%, n=6). The contents of index dompounds including linarin and rosmarinic acid aredetermined by HPLC. The calibration curve are linear at ranges of 0.216-0.648|ìg (forlinarin, r=0.9999), 0.064-0.576|ìg (for rosmarinic acid, r=0.9999) respectively. Theaverage recoveries are 100.20% (RSD 1.98%, n=6) and 100.59%(RSD 2.19%, n=6)respectively.Part three: analysis and discussion of experiments更多还原