【作者】 唐秋莎；

【导师】 张建琼；

【作者基本信息】 东南大学 ， 病原生物学， 2003， 硕士

【摘要】 肿瘤细胞表达HLA I类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL进行肿瘤免疫治疗的关键，肿瘤细胞中HLA I类分子表达异常是肿瘤逃逸免疫监视的重要机制。本研究探讨口腔癌组织标本中HLA I类及相关分子的表达与临床意义，以及口腔癌细胞株中HLA I类及相关分子表达异常的分子基础,为临床成功开展肿瘤免疫治疗提供实验依据。首先应用4种HLA相关分子单抗，采用免疫组化的方法（ABC法）检测口腔癌组织标本中HLA I类分子的表达，统计分析各分子表达与临床分期及病理分级的相关性；再利用流式细胞仪检测细胞系表面HLA I类复合物的表达；半定量RT-PCR检测各细胞系中是否存在多基因mRNA表达水平的异常；Western Blot检测三种细胞系中HLA I类重链、轻链及LMP2分子蛋白水平的表达情况，并利用 IFN-γ处理细胞，观察处理前后各分子在蛋白及 mRNA水平的改变。研究结果表明：在组织学水平，口腔鳞癌中HLA I类分子表达异常，其中LMP2 、HLA-B/C、HLA-A、β2m分子的下调率分别是18%、18%、30%、12%；LMP2 、HLA-B/C、HLA-A、β2m的丢失率分别是25%、13%、25%、23% 。HLA-B/C、HLA-A2、β2m各位点的表达情况与肿瘤的临床分期有显著相关性(P值分别为0.001、0.001、0.008)、HLA-A2、β2m的表达与肿瘤的分级有显著相关性(P值分别为0.001、0.008)。基于细胞系的研究表明，与正常对照细胞系（Hacat ）比较，HLA I类复合物的表达在KB细胞系呈现明显下调（MCN为正常对照的25%），而Tca8113细胞系呈现轻度下调（MCN为正常对照的63%）。RT-PCR检测的结果表明Tca8113 细胞系中 A、B、C、LMP2、LMP7、LMP10基因的mRNA水平表达下调；在KB细胞系中除了A、B、C、LMP7、LMP10基因的mRNA水平表达下调，LMP2、PA28α基因的mRNA显著减少或缺失；而两个细胞系中TAP1, TAP2, Tapasin基因在mRNA水平的表达无改变。Western Blot的结果显示：两个细胞系中轻链蛋白的表达无明显改变 ；在I类重链的B/C基因位点，KB、Tca8113细胞系都呈现明显下调（蛋白表达量分别为Hacat的29%，28%） ；在I类重链的A基因位点，KB细胞系呈现明显下调而Tca8113细胞系呈现轻度下调（蛋白表达量分别为Hacat的38%，63%）；在 LMP2基因位点，KB呈现明显下调而Tca8113细胞系呈现轻度下调（蛋白表达量分别为Hacat的18%，57%）。IFN-γ处理细胞后，纠正了多基因在转录水平的异常，但在检测细胞表面HLA复合物的表达时，KB细胞的表达明显增高（5倍），而Tca8113细胞的表达无改变。以上研究结果提示在我国OSCC中，存在着HLA I类分子表达下调且HLA-B/C、HLA-A2、β2m各位点的表达情况与肿瘤的临床分期有显著相关性；HLA-A2、β2m的表达与肿瘤的分级有显著相关性 。基于细胞系的研究表明：多基因在转录水平的异常也即转录效率的低下很可能是该下调的重要原因。IFN-γ诱导表达实验的结果表明：除了多基因在转录水平的异常，可能还同时存在着转录后或翻译水平的异常。更多还原

【Abstract】 To investigate whether HLA molecules expression downregulated in OSCC or not and the primary mechanism underling this downregulation, we investigate HLA molecules expression of tissue in vivo and of corresponding cell lines cultured in vitro. Using a panel of antibodies, the expression of HLA class I molecules was studied by immunohistochemical technique, flow cytometer and semiquantitative western blot assay. To better characterize the HLA molecules downregulation, we also extended this analysis to RNA level by RT-PCR with specific primers. The result showed that on tissue level, the percentage of downregulation of HLA class I heavy-chain (B/C locus and A2 locus)、β2m and LMP2 was 31%、55%、35% and 43% respectively; In comparison with normal epithelial cell line (Hacat), the expression of HLA class I antigens of OSCC cell lines were also reduced by flow cytometry and western blot assay; and two OSCC cell lines all showed diminished expression of A、B、C、 LMP7、 LMP10 transcripts, further, the LMP2, PA28βtranscripts of KB were almost undetectable. Our results indicate that HLA class I antigen expression downregulated in OSCC tissue and cell lines .The data based on cell lines shows that the downregulation presumably mainly due to low efficiency of HLA genes transcription; other reasons such as defect in the expression of LMP molecules, abnormality of post-transcription regulation may also play a role. The abnormality may provide tumor cells with a mechanism to escape from immune recognition and enhance their metastatic potential.更多还原