【作者】 罗进勇；

【导师】 尹一兵；

【作者基本信息】 重庆医科大学 ， 临床检验诊断学， 2002， 硕士

【摘要】 肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae , S.pn)感受态是一种状态，细菌在这种状态下能够摄取外来基因或者质粒DNA。目前的研究认为感受态是S.pn的重要生理特征，感受态的形成与细菌生长、毒力因子生成、孢子形成、耐药性产生、质粒整合、基因转化等都有密切关系，它是细菌对环境刺激作出反应的结果。感受态相关基因是在感受态形成中才大量表达的特殊基因，它与感受态形成密切相关。研究感受态相关基因，在阐明感受态形成的机制，继而研究细菌变异、进化和致病等方面有重要作用。目的：挑选三种感受态相关基因（comE、comX、cinA）和一种毒力基因dnaK，通过逆转录PCR比较它们在肺炎链球菌野生型和comE缺陷型菌株对数生长期的不同阶段mRNA水平表达情况，研究comE、comX、cinA在感受态形成中的作用，论证comE缺陷型菌株作为感受态缺陷菌株的可行性，同时对dnaK是否也是一种感受态相关基因及其与感受态的关系作初步探讨。<WP=5>方法：用CTM培养基培养野生型肺炎链球菌，在肺炎链球菌对数生长期不同阶段提取RNA，经过逆转录后，采用PCR方法对几种基因进行扩增后，观察comE、comX、cinA以及dnaK在不同阶段的表达情况，然后按同样方法观察comE缺陷菌株中comX、cinA以及dnaK在不同阶段的表达情况。结果：1. comE、comX、cinA三种基因在野生型肺炎链球菌不同阶段的表达很相似，即在生长初期，三种基因均不表达或表达很弱，然后在某一相同时期，三种基因的表达都明显的增强，这说明三者在感受态形成中的表达存在协同性和相似性。而在comE缺陷菌株中，comX和cinA在所有时间段均未见表达。2. dnaK在野生型和comE缺陷型生长各阶段都有表达，而且在两种类型的菌株中其表达趋势没有明显差异，其在野生型和comE缺陷型中的表达与comE、comX和cinA完全不一样。3. 体外人为诱导了肺炎链球菌感受态产生，在CTM培养基中，细菌生长的某一时间段，感受态相关基因comE、comX、cinA表达突然增强。说明此时肺炎链球菌形成感受态。结论：肺炎链球菌在CTM培养基生长时，某一时期出现感受态相关基因的大量表达，说明在外界可以人为诱导肺炎链球菌感受态形成；comE缺陷型可以造成其它两种感受态相关基因不表达，提示 comE可能在肺炎链球菌感受态形成中起关键作用，能控制其它感受态相关基因<WP=6>的表达，因此可以考虑利用comE缺陷型作为肺炎链球菌感受态缺陷菌株，进行肺炎链球菌致病机理的研究；dnaK在野生型和comE缺陷型中均表达，特别是在野生型肺炎链球菌感受态形成阶段dnaK的表达没有发生明显的变化，说明dnaK与肺炎链球菌感受态形成关系不大，它可能不是一种感受态相关基因。更多还原

【Abstract】 Objective: Use RT-PCR to monitor expression of three gene involved in competence of S.pn and a virulence gene dnaK(maybe a gene involved in competence too).Afteramplification . We analysis the function of gene(comE、comX、cinA) in induction of competence, discuss the feasibility to use comE defective S.pn as competence S.pn， and research the function of gene dnaK.Method: S.pn was grown in CTM to a certain OD(550nm) ,extraction RNA of S.pn per 30 minutes , then, after reverse transcription ,use PCR to amplifiction gene comE、comX、cinA and dnaK. Monitor their expression in wild S.pn and comE defective S.pn. Result: 1. In wild S.pn ,comE、comX and cinA’s expression have similarity in different time: in early time ,they did not express(or show very low<WP=8>expression level),and then, at a same time, their expression level increased very highly .But in comE defective S.pn, comX and cinA did not express at all.2. dnaK was express in every time ,not only in wild S.pn, but also in comE defective s.pn。dnaK’s expression was not same as comE、comX and cinA.3. In vitro ,we induced the competence of wild S.pn: in CTM, comE、comX and cinA(gene involved in competence of S.pn) increase very highly at a certain time.Conclusion: In CTM, the gene involved in competence increased very highly after some minutes, In comE defective S.pn, the gene comX and cinA did not express, it tell me comE maybe a important gene ,it can control other gene’s expression. So, we can use comE defective S.pn as competence defective S.pn to research pathogenicity of S.pn. In wild and comE defective S.pn, dnaK show similar expression, and it was different from comE、comX and cinA. We consider dnaK was not a gene involved in competence.更多还原