【作者】 陈瑞辉；

【导师】 王克荣；

【作者基本信息】 南京农业大学 ， 植物病理学， 2000， 硕士

【摘要】 根据正交实验理论，设计一种优化RAPD各个反应组分获得理想图谱的最佳反应浓度方法，能够显著减少反应组分优化次数；大丽轮枝菌RAPD扩增最优反应组分浓度为：MgCl₂ 3.5M；dNTP 0.25mM；Primer 15pm；Taq酶1.5u；DNA 5ng。各反应组分为最优浓度下，单反应组分浓度的改变，RAPD扩增的电泳图谱发生改变；但在一定浓度范围内RAPD扩增的效果稳定，如DNA在2.5～15ng的范围内均能得到稳定、一致的图谱。实验表明，MCl₂与dNTP浓度之比是影响RAPD扩增效果的最主要因素。 从126条随机引物中筛选到9条能产生多态性好、条带稳定的引物。用这9条引物对不同地理来源，营养体亲和性和寄主的198个棉花黄萎病菌进行RAPD扩增，共产生85条带，其中69条为多态性条带。 对已测定营养体亲和性的菌株，根据RAPD图谱计算出的菌株间的遗传相似性，进行聚类分析，可分为两组（RPG1，RPG2），第1营养体亲和群（VCGⅠ）和第2营养体亲和群（VCGⅡ）相应分别归入RPG1和RPG2；RPG1内差异较小，遗传变异量为0.0996，RPG2内差异较大，遗传变异量是0.1592；对已划分RPG而未知其VCG的菌株，进行营养体亲和性测定验证，除了一个菌株外，归在RPG1的菌株都属于VCGⅠ，归入RPG2的菌株均属于VCGⅡ；有5条RAPD扩增带在VCGⅠ内的出现频率大于0.96，其在VCGⅡ的出现频率均小于0.1，这5条带可以看作VCGⅠ的特征条带；结果表明，棉花黄萎病菌的营养体亲和性和特定引物的RAPD分组结果有很强的相关性。 对我国4个主产棉区河北、河南、江苏、山东群体分析表明，各省群体遗传相似性较高，总的遗传变异量为0.0947，其中72.5％由群体内的变异引起，12.5％由省内群体间引起，15％由群体间的变异引起；群体间的基因流动值为2.83，群体间，亚群体间均存在较高的基因流动；落叶型特征条带在各个亚群体内出现频率均很高，表明棉花黄萎病菌落叶型菌株在我国主产棉区的河北、河南、山东、江苏4省棉区分布广泛，并已成为或正在成为优势种群。 棉花黄萎病菌落叶型菌系和非落叶型菌系差异明显，且落叶型菌系之间相似性很高，推断落叶型菌系并非由非落叶型菌系毒性基因位点发生突变而来。更多还原

【Abstract】