刺五加注射液对顺铂诱导的HEI-OC1细胞自噬、凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨刺五加注射液对顺铂诱导的HEI-OC1细胞自噬凋亡的影响及潜在的作用机制。方法 取对数生长期的小鼠耳蜗毛细胞HEI-OC1,将细胞分为4组：对照组(正常培养的HEI-OC1细胞)、刺五加组(3μg/ml)、顺铂组(8μg/ml)、顺铂+刺五加组(8μg/ml+3μg/ml)。CCK-8法检测各组HEI-OC1细胞在0、24、48、72 h时的增殖情况；单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色检测细胞内自噬体情况；吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色检测细胞凋亡形态；流式细胞术检测各组HEI-OC1细胞凋亡；分光光度法检测各组HEI-OC1细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平；Western印迹检测自噬蛋白微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、重组人自噬效应蛋白(Beclin)-1、P62,凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3及PTEN诱导假定激酶(PINK)1/E3泛素连接酶(Parkin)通路蛋白。结果 与对照组、刺五加组比较，顺铂组HEI-OC1细胞在24、48、72 h时的OD450值、SOD水平、P62、Bcl-2、PINK1及Parkin蛋白相对表达量显著降低，MDC染色细胞荧光强度、呈黄色、橙色荧光的HEI-OC1细胞数目、细胞凋亡率、ROS、MDA、细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、Bax、Cleaved-caspase-3、线粒体融合蛋白(Mfn)2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与顺铂组比较，顺铂+刺五加组HEI-OC1细胞在24、48、72 h时的OD450值、MDC染色细胞荧光强度、SOD水平、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、PINK1、Parkin蛋白相对表达量显著升高，呈黄色、橙色荧光的HEI-OC1细胞数目、细胞凋亡率、ROS水平、MDA水平、细胞中P62、Bax、Cleaved-caspase-3、Mfn2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 刺五加注射液可促进顺铂诱导的HEI-OC1细胞自噬，抑制细胞凋亡，增强细胞的抗氧化应激能力，该机制可能与激活PINK1/Parkin通路有关。更多还原