泥鳅精原细胞培养体系构建及功能性精子获得

【摘要】 本研究旨在建立泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)精原细胞的体外培养体系，并实现功能性精子的获得。通过酶消化法进行原代培养，比较了胰酶与Ⅱ型胶原酶的消化效率，最终确定以DMEM/F12为基础培养基，添加5%FBS、1%鳟鱼血清、100 ng/mL EGF、1 mmol/L β-巯基乙醇及100 ng/mL IGF-1,配制为完全培养基。采用15%～45%Percoll不连续密度梯度离心富集精原细胞，并通过qPCR检测ly75、oct4、vasa、piwi、sycp3、rec8等基因的表达以评估细胞纯度。在培养体系中添加50 U/mL HCG、100 ng/mL 11-KT和100 ng/mL DHP诱导精子发生，7 d内精子密度由3.88×10~6个/mL提高至6.97×10~6个/mL。所获精子的活力参数与体内精子无显著差异，体外受精率约为40%,且胚胎发育正常。结果表明，该培养体系能够稳定产生具有受精能力的功能性精子，为泥鳅及相关鱼类的生殖细胞工程与配子保存研究提供了有效平台。更多还原