靶向MyD88基因siRNA的筛选及其对狂犬病病毒感染的影响初探

【摘要】 为探究MyD88在狂犬病病毒(Rabies virus, RABV)感染中的作用，本实验针对MyD88的mRNA靶序列设计并合成3对不同的siRNA序列，利用脂质体瞬时转染BV2细胞，通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对BV2细胞中MyD88的干扰效率。结果显示，转染24 h后，各实验组中MyD88 mRNA表达量均显著低于阴性对照组，其中siRNA-M174的效果最佳、siRNA-M587次之；将200 nM siRNA-M174、siRNA-M587转染BV2细胞24 h后，经计算，干扰效率分别为75.35%和71%,两者共转染后，干扰效率为86.5%。结果表明，本实验成功筛选出靶向MyD88基因的有效干扰序列。脂质体瞬时转染筛选出的2对siRNA于BV2细胞，RABV接种BV2细胞，通过实时荧光定量PCR及Western blot检测。接毒后转染24 h,实验组MyD88基因的mRNA表达量低于阴性对照组，MyD88蛋白及RABV的N蛋白表达量下降。本实验结果证实了MyD88基因被特异性siRNA干扰后，也影响RABV的蛋白合成，为后续MyD88与狂犬病病毒的互作研究提供实验依据。更多还原