LncRNA GAS5调节miR-217/BMP2轴对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

【摘要】 目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)生长抑制特异性基因(GAS)5通过调节微小RNA-217(miR-217)/骨形态发生蛋白(BMP)2轴对人牙周膜干细胞(hPDLSC)成骨分化的影响。方法 体外培养hDPSC,成骨诱导分化后采用碱性磷酸酯酶(ALP)染色和茜素红(AR)S染色检查hPDLSC的成骨分化能力；实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测hPDLSC中lncRNA GAS5、miR-217和成骨分化标志物BMP2、Runt相关转录因子(RUNX)2、骨钙素(OCN)的基因表达水平。构建携带sh-GAS5的慢病毒载体，通过感染hDPSC建立稳定沉默GAS5的hDPSC细胞，并分为sh-NC组(转染sh-NC慢病毒载体)、sh-GAS5组(转染sh-GAS5慢病毒载体)、sh-GAS5+anti-miR-NC组(共转染sh-GAS5和anti-miR-NC)、sh-GAS5+anti-miR-217组(共转染sh-GAS5和anti-miR-217)、sh-GAS5+anti-miR-217+sh-con组(共转染sh-GAS5、anti-miR-217和sh-con)和sh-GAS5+anti-miR-217+sh-BMP2组(共转染sh-GAS5、anti-miR-217和sh-BMP2)。细胞计数(CCK)-8法评估hPDLSC增殖；ALP和ARS染色及定量检测hDPSC的早期ALP活性和晚期矿化结节的形成情况；Western印迹检测hPDLSC中BMP2、RUNX2、OCN蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验评估lncRNA GAS5、miR-217和BMP2之间的关系。结果 成骨诱导分化的hPDLSC中ALP活性和矿化结节形成增加，GAS5和BMP2、RUNX2与OCN基因表达增加，miR-217水平降低，差异显著(P<0.05)。GAS5靶向负调控miR-217表达，BMP2是miR-217的靶标。沉默GAS5可明显抑制细胞增殖，明显降低ALP活性，明显减少矿化结节形成，并明显降低BMP2、RUNX2和OCN蛋白水平(P<0.05);抑制miR-217表达可部分逆转沉默GAS5对hPDLSC增殖及成骨分化的作用，差异显著(P<0.05);敲低BMP2可明显减弱miR-217和GAS5下调对hPDLSC的影响(P<0.05)。结论 沉默GAS5可能调节miR-217/BMP2轴抑制hPDLSC成骨分化。更多还原