蒙药珍宝丸促进脑缺血/再灌注大鼠血管新生作用及其含药血清对缺氧/复氧人脑微血管内皮细胞血管形成的影响

【摘要】 目的 观察蒙药珍宝丸促进脑缺血/再灌注大鼠血管新生作用及其含药血清对缺氧/复氧人脑微血管内皮细胞(HBMEC)血管形成的影响。方法 选取50只雄性Wistar大鼠，取40只随机分为假手术组、模型组、珍宝丸组及银杏叶组，各10只，模型组、珍宝丸组及银杏叶组制备脑缺血/再灌注模型，假手术组操作同脑缺血/再灌注模型，但线栓插入1 cm后即可拔出。珍宝丸组给予蒙药珍宝丸灌胃，银杏叶组给予银杏叶软胶囊灌胃，假手术组及模型组均给予相同体积生理盐水灌胃，2次/d,连续给药7 d。评估各组神经功能情况、脑梗死面积及微血管密度情况。取剩余10只大鼠，5只给予蒙药珍宝丸灌胃，5只给予银杏叶软胶囊灌胃，2次/d,均连续给药7 d后颈椎脱臼处死，分离含药血清备用。体外培养HBMEC,将对数期细胞分为正常培养组、缺氧/复氧组、珍宝丸含药血清5%、10%、20%组、银杏叶含药血清组，其中缺氧/复氧组、珍宝丸含药血清5%、10%、20%组及银杏叶含药血清组进行缺氧/复氧建模时，给予对应浓度血清进行培养；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力；划痕实验检测各组细胞迁移能力；管腔形成实验观察内皮细胞血管形成能力；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞晚期氧化蛋白产物(AOPP)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量；Western印迹检测Toll样受体(TLR)4、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、70 kD核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)蛋白表达。结果 与假手术组相比，模型组神经功能评分升高，脑组织出现梗死灶，缺血区域新生血管数量增加，差异有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比，珍宝丸组和银杏叶组神经功能评分显著降低，白色梗死灶面积均显著缩小，血区域新生血管明显增加(均P<0.05)。与正常培养组比较，缺氧/复氧组细胞活力明显降低，相对迁移距离明显缩短，细胞管腔节点数、网眼数、分支数明显减少，管腔长度明显缩短，细胞外液AOPP、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α含量明显升高，SOD含量明显降低，细胞中VEGF、HGF、TLR4、TRIF、p-Akt/Akt、p-mTOR/TOR及P70S6K表达均明显升高(均P<0.05);与缺氧/复氧组比较，珍宝丸含药血清5%、10%、20%组及银杏叶含药血清组细胞活力明显升高，相对迁移距离明显增加，细胞管腔节点数、网眼数、分支数明显增加，管腔长度明显增长，细胞外液AOPP、MDA、IL-6、IL-1β及TNF-α含量明显降低，SOD含量明显升高，细胞中VEGF、HGF、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR及P70S6K表达均明显升高，TLR4、TRIF表达均明显降低，且呈浓度依赖性(均P<0.05)。结论 通过在体动物实验(脑缺血/再灌注)和体外细胞培养证实(缺氧/复氧),蒙药珍宝丸可通过TLR4/TRIF信号通路表达抑制氧化应激炎症反应，并激活Akt/mTOR/P70S6K信号通路促进血管形成，发挥神经保护作用。更多还原