FOXM1通过调节KIF20A介导巨噬细胞M2极化对食管鳞状细胞癌细胞的作用

【摘要】 目的 探究叉头转录因子(FOX)M1和驱动蛋白家族(KIF)20A对食管鳞状细胞癌细胞的作用及其可能的作用机制。方法 体外培养正常食管上皮细胞(Het-1A)、人食管鳞状细胞癌细胞(KYSE70)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)。佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞产生M0巨噬细胞。将M0巨噬细胞与KYSE70细胞共培养以获得肿瘤相关巨噬细胞(TAM),收集共培养上清液处理KYSE70细胞，分为空白对照组(不进行转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-FOXM1组(转染si-FOXM1)、si-NC+oe-NC组(转染si-NC和oe-NC)、si-FOXM1+oe-NC组(转染si-FOXM1和oe-NC)、si-NC+oe-KIF20A组(转染si-NC和oe-KIF20A)、si-FOXM1+oe-KIF20A组(转染si-FOXM1和oe-KIF20A),荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀(ChIP)-PCR实验检测FOXM1对KIF20A的转录调控作用；实时荧光定量(qRT)-PCR和Western印迹检测FOXM1、KIF20A、精氨酸(Arg)-1、白细胞介素(IL)-10、E-钙黏蛋白(cadherin)和N-cadherin表达；流式细胞术检测TAM细胞中CD68~+/CD206~+细胞率；EdU实验检测细胞增殖；CCK-8检测细胞活力；Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果 与Het-1A组相比，KYSE70组细胞中FOXM1和KIF20A表达明显升高(P<0.001)。FOXM1通过靶向结合KIF20A启动子区域调节KIF20A表达。与si-NC+oe-NC组相比，si-FOXM1+oe-NC组TAM细胞中CD68~+/CD206~+细胞率、Arg-1和IL-10蛋白表达明显降低(P<0.05),si-NC+oe-KIF20A组变化明显升高(P<0.05);与si-FOXM1+oe-NC组相比，si-FOXM1+oe-KIF20A组TAM细胞中CD68~+/CD206~+细胞率、Arg-1和IL-10蛋白表达明显升高(P<0.05)。用共培养上清液处理KYSE70细胞，与空白对照组相比，TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力受到明显促进(P<0.05);与si-NC+oe-NC+TAM组相比，si-FOXM1+oe-NC+TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力明显抑制，而si-NC+oe-KIF20A+TAM组明显促进(P<0.05);与si-FOXM1+oe-NC+TAM组相比，si-FOXM1+oe-KIF20A+TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力受到明显促进(P<0.05)。结论 FOXM1通过上调KIF20A表达促进巨噬细胞M2极化从而促进KYSE70细胞增殖和转移。更多还原