黄瓜单性结实果实酵母双杂交文库的构建及CsCML25互作蛋白的筛选

【摘要】 为研究黄瓜单性结实形成的分子调控机制，以黄瓜单性结实自交系‘EC1’为材料，分别取开花前1 d至开花后4 d的子房，提取RNA后等量混合，采用SMART方法构建酵母双杂cDNA文库。结果表明，构建的文库总克隆数为1.16×107CFU，平均插入片段长度≥1 000 bp，阳性率为100%，符合建库的标准，可用于后续的酵母双杂交筛选。以黄瓜单性结实关键调控因子CsCML25为诱饵，构建pGBKT7-CML25诱饵蛋白表达载体，经自激活活性分析及不同浓度3AT对诱饵蛋白自激活活性抑制效果分析，使用SD-TLH+20 mM 3AT平板可完全抑制诱饵蛋白自激活活性。利用酵母双杂交筛选构建的黄瓜单性结实果实cDNA文库，得到96个初始阳性克隆。利用DNA测序、BLAST分析以及酵母回转验证等方法，最终获得27个可能与CsCML25相互作用的候选蛋白，为从分子水平探究CsCML25调控黄瓜单性结实的机制提供了理论基础。更多还原