重铬酸钾对基于DNA提取鉴定粪样中布氏和毒害艾美耳球虫感染类型影响的研究

【摘要】 为探究重铬酸钾（PD）对基于DNA提取鉴定粪便样品中鸡球虫感染类型结果的影响，将2.5%PD暂存的新鲜鸡粪样品随机分成4组，分别用3 mL PD、2 mL PD和1 mL ddH₂O、1 mL PD和2 mL ddH₂O、3 mL ddH₂O,以1 mL/次，先PD后ddH₂O的方法对鸡粪样品进行洗涤。洗涤结束后取上清液，测OD₄₉₀值；重悬沉淀，取200μL/管提取DNA,进行PCR扩增及其产物的琼脂糖凝胶电泳检测，同设阳性、空白对照和不同循环数对照。用超微量核酸蛋白浓度测定仪检测PCR产物浓度并进行统计学分析。结果表明：随ddH₂O洗涤次数增多，所得上清的OD₄₉₀值逐步降低，洗涤2次时，与ddH₂O对照组间差异不明显；对提取所得的DNA进行PCR扩增时，分别得到片段大小约为601 bp和702 bp的条带，空白对照组无此条带，且所用Nec-F/R引物的扩增较Bru-F/R引物的特异性高，36个循环数较30个和33个循环的电泳效果好，且所得PCR产物浓度间均差异不明显。结果表明，PD对基于DNA提取鉴定粪样中布氏艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫两种鸡球虫感染类型的结果无明显影响，可用于流行病学调查样品采集。更多还原