miR-25通过TGF-β1途径降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

【摘要】 目的 探讨miR-25在缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞凋亡过程中的作用及机制。方法 H9C2细胞培养24 h后进行慢病毒感染，空白对照(control)组未进行转染；阴性对照(Lv-control)组转染Lv-control-miRNA模拟物(mimic);Lv-anti-control组转染Lv-control-miRNA-抑制剂(inhibitor);Lv-miR-25组转染Lv-miR-25 mimic; Lv-anti-miR-25组转染Lv-miR-25 inhibitor。按照脂质体转染试剂Lipofectamine2000试剂盒说明，Contol-shRNA组转染control-shRNA;HMGB1-shRNA组转染HMGB1-shRNA,经培养后筛出稳定细胞系。选取高表达miR-25 H9C2心肌细胞，Lv-miR-25组转染Lv-miR-25 mimic, Lv-miR-25+SB431542组转染Lv-miR-25 mimic后加入TGF-β1/Smads抑制剂SB431542共培养。稳定转染后给予缺氧/复养处理。Western印迹检测高迁移率族蛋白(HMG)B1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)-3、转化生长因子(TGF)-β1、Smad3、磷酸化(p)-Samd3、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、p-ERK1/2蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Lv-miR-25组HMGB1、Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著低于control组、Lv-control组、Lv-anti-control组、Lv-anti-miR-25组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著高于control组、Lv-control组、Lv-anti-control组、Lv-anti-miR-25组(P<0.05)。与Contol-shRNA组比较，HMGB1-shRNA组HMGB1、TGF-β1、p-Samd3、Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Lv-miR-25组比较，Lv-miR-25+SB431542组Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平及细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。结论 miR-25抑制缺氧/复氧诱导的H9C2细胞凋亡，其作用机制通过靶向调控HMGB1,降低TGF-β1导致的心肌凋亡。更多还原