三种犬呼吸道常见病毒多重PCR检测方法建立

【摘要】 为建立犬呼吸道冠状病毒（Canine respiratory coronavirus,CRCoV）、犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）、犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）3种病毒的多重PCR方法,根据GenBank中CRCoV、CPV和CDV的基因序列,进行BLAST同源性分析,找出保守序列,并根据保守序列对每个病毒设计引物,建立扩增3种病毒的多重PCR方法,并通过已建立的方法对收集的呼吸道病犬病料进行检测。结果表明,所建立的三重PCR体系组成为2×Taq Mix 12.5μL,3对上、下游引物各0.6μL,混合模板1μL,ddH₂O 7.9μL;扩增程序为94℃5 min;94℃30 s,54℃1 min,72℃24 s,共35个循环;72℃8 min。该方法具有较高的灵敏性和特异性。临床验证实验表明,本实验所建立的多重PCR方法可用于临床诊断。更多还原