与α-烯醇化酶相关的ELISA方法的建立及在肝纤维化检测中的应用探索

【摘要】 目的探索肝纤维化期诊断的潜在标志物,建立与α-烯醇化酶(ENO1)相关的酶联免疫吸附试验(ELISA)模型,并应用于肝纤维化期的抗α-烯醇化酶自身抗体的检测。方法人工合成获得ENO1基因序列设计特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增ENO1基因序列,构建该基因的克隆载体及表达载体,通过IPTG诱导表达重组蛋白ENO1。以纯化的重组蛋白为包被抗原建立ELISA模型,用建立的模型检测肝纤维化期和肝硬化期患者血清中ENO1抗体的表达。结果获得47×103 ENO1蛋白,成功建立ENO1-ELISA模型,检测肝纤维化期患者血清ENO1抗体阳性率为25.7%,高于肝硬化期患者的10.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人源α-烯醇化酶可以通过原核表达技术获取,建立的ENO1-ELISA模型可以用于α-烯醇化酶抗体的检测,α-烯醇化酶对肝纤维化的早期诊断具有重要意义。更多还原