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苏丹型埃博拉病毒糖蛋白原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立  
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【英文篇名】 Prokaryotic expression of Sudan ebolavirus GP and the development of recombinant protein-based indirect ELISA for antibody detection
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【作者】 吴芳芳; 曹增国; 焦翠翠; 王琪; 迟航; 侯朋飞; 黄培; 金宏丽; 赵永坤; 李忠义; 王化磊; 杨松涛; 夏咸柱;
【英文作者】 WU Fang-fang; CAO Zeng-guo; JIAO Cui-cui; WANG Qi; CHI Hang; HOU Peng-fei; HUANG Pei; JIN Hong-li; ZHAO Yong-kun; LI Zhong-yi; WANG Hua-lei; YANG Song-tao; XIA Xian-zhu; Key Laboratory of Zoonosis Prevention and Control of Jilin Province; Military Veterinary Institute; Academy of Military Medical Sciences; College of Veterinary Medicine; Jilin University; College of Animal Science and Technology; Jilin Agricultural University;
【作者单位】 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室; 吉林大学动物医学学院; 吉林农业大学动物科学技术学院;
【文献出处】 中国病原生物学杂志 , Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱 2018年 01期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 苏丹型埃博拉病毒; 原核表达; 糖蛋白; ELISA;
【英文关键词】 SUDV; prokaryotic expression; GP; ELISA;
【摘要】 目的原核表达苏丹型埃博拉病毒(Sudan virus,SUDV)糖蛋白(GP),并作为包被抗原建立抗体间接ELISA检测方法。方法 PCR扩增SUDV GP基因片段,克隆至pET30a(+)表达载体,IPTG诱导表达SUDV GP,经HisNi柱纯化,SDS-PADE和Western blot鉴定正确的SUDV GP作为包被抗原建立SUDV抗体间接ELISA方法,并对实验条件进行优化。结果SUDV GP在大肠杆菌中以包涵体的形式表达,建立的抗体间接ELISA检测方法最佳SUDV GP包被量为2μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶320,最佳作用时间1.5h,HRP标记羊抗鼠IgG最佳稀释度1∶10 000,TMB最佳显色时间为7min。该方法的特异性强,样品检测结果与已知血清的符合率为100%,检测SUDV阳性血清的敏感度为1∶40 960,SUDV GP批间及批内的实验结果变异系数(CV)均小于10%。结论成功表达SUDV GP并建立SUDV抗体间接ELISA检测方法,为疫苗免疫效果的评价、疫病的监测及SUDV抗体检测试剂盒的研发奠定了基础。
【英文摘要】 Objectives To express SUDV GP in a prokaryotic system and to develop recombinant protein-based indirect ELISA for antibody detection. Methods A fragment of SUDV GP was amplified with PCR and then cloned into the prokaryotic expression vector pET30 a(+).Expression of GP was induced with IPTG.The IPTG concentration and time required for induction were optimized.Expressed products were purified with His-Ni affinity chromatography,followed by SDS-PAGE and Western blotting.An indirect ELISA technique was devised...
【基金】 国家科技重大专项(重大新药创制)(No.2015ZX09102025)
【更新日期】 2018-04-08
【分类号】 R373
【正文快照】 2.吉林大学动物医学学院;3.吉林农业大学动物科学技术学院)***埃博拉病毒病(Ebola virus diseases,EVD)是由高致病性埃博拉病毒(Ebola virus)引起的烈性传染病[1-2]。据WHO报导,截至2016年6月10日全球确诊及疑似感染病例已达28 616例,其中死亡11 310例[3]。根据发现地的不同,将

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