CRISPR/Cas9系统是目前最常用的基因组定点编辑工具,通过瞬时表达试验提前验证Cas9/sgRNA载体诱导的突变效率,可以提高基因组定点编辑的成功率,且显著节省费用及时间。本研究开发了一种利用农杆菌介导的操作简单、适用性好、成本低廉的叶片瞬时表达技术,可用于快速检测甘蓝型油菜和甘蓝中CRISPR/Cas9的编辑效果。针对甘蓝型油菜Bna C. WRKY11. a基因设计了2个靶位点Tgt1(Target 1)和Tgt2(Target 2),并构建了Cas9/sgRNA-Tgt1/2多重突变载体,在甘蓝型油菜叶片中瞬时表达后,2个靶位点都出现突变,突变效率达11. 2%～82. 2%。针对甘蓝Bol PDS3基因设计了1个靶位点Tgt3(Target3),并构建了Cas9/sgRNA-Tgt3敲除载体,在甘蓝叶片瞬时表达后,Tgt3发生了突变,且大部分为碱基缺失突变,缺失的数目为1～18bp不等,同时还存在少量碱基插入以及碱基替换等突变类型。结果表明这种甘蓝型油菜和甘蓝的叶片瞬时表达技术操作简单、适用性好、成本低廉,可用于CRISPR/Cas9的编辑效果快速检测。
【英文摘要】
CRISPR( clustered regularly interspaced palindromic repeats)/Cas9( CRISPR-associated 9) system is the simplest and most commonly used targeted genome editing tool,which has shown the enormous application potential in many fields. The mutation efficiency mediated by CRISPR/Cas9 was affected by many factors,it used transient expression technique to evaluate the mutation efficiency of Cas9/sg RNA vector before generating the mutant plants,which was a favourite way to improve research efficiency. In this study,...
| 
推荐 
点击下列相关研究机构和相关文献作者，可以直接查到这些机构和作者被《中国知识资源总库》收录的其它文献，使您全面了解该机构和该作者的研究动态和历史。
