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泥鳅抗菌肽在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性检测  
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【英文篇名】 High-level expression in Pichia pastoris SMD1168 of misgurin and its antimicrobial activity
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【作者】 马萍; 薛林贵; 尚海; 何小燕; 谢长庚; 王霞; 范桃桃; 陈熙明; 姜金融; 李婷;
【英文作者】 MA Ping; XUE Lin-Gui; SHANG Hai; HE Xiao-Yan; XIE Chang-Geng; WANG Xia; FAN Tao-Tao; CHEN Xi-Ming; JIANG Jin-Rong; LI Ting; School of Chemical and Biological Engineering; Lanzhou Jiaotong University; Key Laboratory of Desert and Desertification; Northwest Institute of Eco-Environment and Resources; Chinese Academy of Sciences; Ministry of Education Key Laboratory of Cell Activities and Stress Adaptations; Lanzhou University;
【作者单位】 兰州交通大学化学与生物工程学院; 中国科学院西北生态环境资源研究院沙漠与沙漠化重点实验室; 兰州大学细胞活动与逆境适应教育部重点实验室;
【文献出处】 微生物学通报 , Microbiology China, 编辑部邮箱 2018年 05期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 泥鳅抗菌肽; 毕赤酵母; 发酵; 抑菌活性; 溶血活性; 耐酸碱;
【英文关键词】 Misgurin; Pichia pastoris; Fermentation; Antimicrobial activity; Hemolytic activity; Tolerance acid and alkali;
【摘要】 【背景】泥鳅抗菌肽Misgurin是泥鳅非特异性免疫防御系统的重要组成部分,具有广谱和较强的抗菌能力,所以获得大量抗菌肽是很有必要的。【目的】为了实现高效表达泥鳅抗菌肽Misgurin。【方法】将泥鳅抗菌肽的目的基因与p PIC9K表达载体连接,构建重组表达质粒p PIC9K-misgurin,Sal I酶切线性化,再通过电击法将其整合到毕赤酵母SMD1168染色体上。在MD固体培养基挑选阳性克隆子到MD液体培养基中,30°C、200 r/min摇瓶培养96 h,转接到BMMY液体培养基进行诱导表达,每隔24 h加入5%的甲醇。通过比较抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的大小,筛选出活性较高的菌株p PIC9K-misgurin-22。将该菌株在100 L的发酵罐中诱导表达,48 h后进行活性检测。【结果】经Tricine-SDS-PAGE蛋白胶检测和质谱分析鉴定,p PIC9K-misgurin-22菌株诱导表达的活性物质为抗菌肽Misgurin。发酵罐发酵48 h相对于摇瓶发酵48 h,抗大肠杆菌的生物效价提高了1.47倍,抗金黄色葡萄球菌的生物效价提高了1.43倍;抗菌肽Misgurin对鲍曼不动杆...
【英文摘要】 [Background] Misgurin is an important component of nonspecific immune defense system in Misgurnus anguillicaudatus. It has broad spectrum and strong antimicrobial ability. Therefore, it is necessary to obtain large quantities of antimicrobial peptides. [Objective] To achieve high-efficient expression of misgurin. [Methods] Misgurin gene was cloned into expression vector p PIC9 K in order to construct recombinant expression plasmid p PIC9 K-misgurin. Using Sal I restriction endonuclease digest linearization ...
【基金】 甘肃省科技支撑计划(1504FKCA015); 国家自然科学基金(31260135,31400437)~~
【更新日期】 2018-05-28
【分类号】 Q51;Q78
【正文快照】 泥鳅是分布于亚洲沿岸的底层经济鱼类,营养价值较高,曾与人参相媲美。目前,泥鳅自身抵抗外源致病菌产生的天然免疫活性物质成为国内外的研究热点,这种活性物质被称为抗菌肽(Antimicrobialpeptides,AMPs)。抗菌肽是存在于宿主防御系统的小分子阳离子多肽,广泛分布于寄主生物,包?

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