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敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建  
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【英文篇名】 Construction of HeLa cell lines with SOSSB1,SOSSB2 and SOSSC genes knocked out
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【作者】 孙瑜; 陈红霞; 齐永; 李素芹; 沈万鹏; 饶继先; 李佳萌; 李晓玲; 李越希;
【英文作者】 SUN Yu; CHEN Hong-xia; QI Yong; LI Su-qin; SHEN Wan-peng; RAO Ji-xian; LI Jia-meng; LI Xiao-ling; LI Yue-xi; Department of Biochemistry and Molecular Biology; School of Basic Medicine; Nanjing Medical University;
【作者单位】 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系; 南京军区军事医学研究所; 中国药科大学生命科学与技术学院;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2018年 11期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 SOSS基因; 基因敲除; HeLa细胞株; CRISPR/Cas9n双切口酶;
【英文关键词】 SOSS gene; Gene knock; HeLa cell lines; CRISPR/Cas9n double nickase;
【摘要】 目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。
【英文摘要】 Objective To construct the stable HeLa cell lines with SOSSB1,SOSSB2 and SOSSC genes knocked out.Methods The A and B sgRNAs(single guide RNA)targeting to exons of SOSSB1,SOSSB2 and SOSSC genes and the complementary strands were designed and synthesized,then inserted into Bbs Ⅰ cohesive ends-containing PX462 linear vector. The constructed recombinant plasmids were identified by restriction analysis and sequencing and transfected to HeLa cells. The stable HeLa cells were screened with 2 μg/mL puromycin. The r...
【基金】 江苏省自然青年基金项目(BK20160131,BK20160130); 国家自然青年基金项目(31701181,31600151)
【更新日期】 2018-11-23
【分类号】 Q78
【正文快照】 SOSS复合物是单链DNA结合蛋白(single-stran-ded DNA binding proteins,SSBs)复合物,由SOSS1和SOSS2构成。SOSS1主要由INTS3(SOSSA)、hSSB1(SOSSB1)和C9orf80(SOSSC)组成[1],SOSS2与其组成相似,主要区别为SOSS2复合物用hSSB2(SO-SSB2)代替hSSB1(SOSSB1)。SOSS1和SOSS2在功能上?

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