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重组人源化抗CD52单克隆抗体补体依赖的细胞毒性检测方法的建立及验证  
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【英文篇名】 Development and verification of method for detection of complement-dependent cytotoxicity of recombinant humanized anti-CD52 monoclonal antibody
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【作者】 秦海艳; 熊颖; 陈继军; 乔玉玲; 安晨; 张影; 陈军; 宋兰兰; 王炎超; 赵祖波; 庄超; 毛晓燕;
【英文作者】 QIN Hai-yan; XIONG Ying; CHEN Ji-jun; QIAO Yu-ling; AN Chen; ZHANG Ying; CHEN Jun; SONG Lan-lan; WANG Yan-chao; ZHAO Zu-bo; ZHUANG Chao; MAO Xiao-yan; Lanzhou Institute of Biological Products Co.; Ltd.;
【作者单位】 兰州生物制品研究所有限责任公司; 上海泰因生物技术有限公司;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2018年 06期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 CD52; 单克隆抗体; 补体依赖的细胞毒性; ATP显色法;
【英文关键词】 CD52; Monoclonal antibody(McAb); Complement-dependent cytotoxicity; ATP chromogenic method;
【摘要】 目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)检测方法,并对其进行验证。方法将系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体加入已接种表达CD52抗原的人淋巴瘤靶细胞中,再加入人血浆冻干补体后,采用ATP显色法定量检测靶细胞的活细胞数目。对试验条件进行优化,并对方法进行专属性、准确性、精密度、线性验证。结果重组人源化抗CD52单克隆抗体在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:Y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D。方法经过优化后,确定人淋巴瘤RAMOS细胞为靶细胞,抗体稀释初浓度为120μg/m L,稀释倍数为1∶1.4。不同浓度的无关抗体均对靶细胞无细胞毒性,方法专属性良好。理论CDC活性为50%、75%、100%、125%、150%的试样测定的相对CDC活性分别为(51.33±4.36)%、(75.80±6.31)%、(97.7±7.45)%、(133.27±10.7)%和(158.77±14.13)%,回收率均在80%~120%范围内,相对CDC活性和回收率的RSD均小于10%,方法准确性良好。将100%相对CDC活性...
【英文摘要】 Objective To develop and verify a method for detection of complement-dependent cytotoxicity(CDC) of recombinant humanized anti-CD52 monoclonal antibody(Mc Ab). Methods Human lymphoma cells in which CD52 antigen was expressed were added with serially diluted recombinant humanized anti-CD52 Mc Ab and the freeze-dried complement, and incubated at 37 ℃ in 5% CO_2 incubator for 3 h. The number of viable target cells was determined by ATP chromogenic method. The test condition was optimized, and the developed met...
【基金】 甘肃省科技重大专项(仿Campath生物相似药的研究开发)(1502FKDA008)
【更新日期】 2018-06-25
【分类号】 R392
【正文快照】 CD52抗原由一条很短的肽链组成,仅有12个氨基酸残基(GQNDTSQTSSPS),在C-末端通过糖基磷脂酰肌醇(glycosyl-phosphatidylinositol,GPI)锚定连接于细胞膜表面,N-末端3位天冬酰胺连接有1个复杂的糖基,在其四角岩藻糖基化的甘露糖核心上有几个唾液酸化的多聚乳糖胺单位[1]。CD52基?

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