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重组枯草芽孢杆菌诱导表达AiiA及酶活性鉴定  
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【英文篇名】 Expression and activity bioassary of aiiA gene with the promoter Pspac in Bacillus subtilis
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【作者】 梁倩怡; 明飞平; 贾军皓; 赵培静; 李姣清; 邓锦波; 张淑霞; 曾敏; 蔡海明; 马苗鹏; 张玲华;
【英文作者】 Qianyi Liang; Feiping Ming; Junhao Jia; Peijing Zhao; Jiaoqing Li; Jinbo Deng; Shuxia Zhang; Min Zeng; Haiming Cai; Miaopeng Ma; Linghua Zhang; Guangdong Provincial Key Laboratory of Protein Function and Regulation in Agricultural Organisms; College of Life Sciences; South China Agricultural University; Guangzhou Institute of Microbiology;
【作者单位】 华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室; 广州市微生物研究所;
【文献出处】 生物技术 , Biotechnology, 编辑部邮箱 2018年 06期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 群体感应; AHLs信号分子; aiiA基因; Pspac启动子; 桥式PCR; 枯草芽孢杆菌;
【英文关键词】 quorum sensing; AHLs; aiiA gene; promoter Pspac; SOE PCR; Bacillus subtilis;
【摘要】 [目的]由于Aii A(Autoinducer inactivation,Aii A)蛋白能有效降解AHLs(N-acyl-homoserine,AHLs),导致病原菌由于群体淬灭(Quornm quenching,QQ)失去生存优势而抑制其致病能力;利用强启动子构建能高效表达Aii A蛋白的枯草芽孢杆菌,检验枯草芽孢杆菌中Pspac启动子表达Aii A蛋白的能力,寻求有效生物防治手段防治病原菌侵害。[方法]通过已知的aiiA基因序列和启动子Pspac序列设计引物,经搭桥PCR搭连启动子Pspac和aiiA基因,构建重组表达载体Pspac-aiiA-PHY300PLK,经酶活反应确定重组菌活性。[结果]成功克隆并搭连Pspac启动子和aiiA基因,Aii A蛋白成功在重组枯草芽孢杆菌C11中表达。经酶活检验,野生菌株和重组菌株Pspac-aiiA-C11有降解信号分子AHLs的能力,但重组菌降解能力更强。[结论]重组菌Pspac-aiiA-C11较野生菌株有更强的降解AHLs效力;要利用工程菌进行生物防治还需进一步提高工程菌表达Aii A蛋白的能力及稳定性。
【英文摘要】 [Objective]Virulence of pathogens can be inhibited by quornm quenching( QQ) in the way of Aii A protein degradating AHLs. To construct Bacillus subtilis which is capable of efficiently expressing Aii A,in Bacillus subtilis experssion system,the ability of the Pspac promoter to express Aii A is needed to be tested.[Methods]Pspac and aiiA gene were ligated by SOE PCR. And the Pspac-aiiA fragment was inserted into PHY300 PLK then transfer into Bacillus subtilis C11. The AHLs degradation ability was detected. [...
【基金】 广东省自然基金项目(“CRIP1通过调节Zn2+水平控制猪肠道沙门氏菌感染的机制研究”,No.2018A030313625); 广州市科技攻关计划项目(“3-OH PAME淬灭酶分泌型高效青枯病复合生防菌剂研发及应用”,No.201803020001)
【更新日期】 2019-01-21
【分类号】 Q78;S476.1
【正文快照】 细菌能通过群体感应(Quorum-sensing,QS)系统感应自身及周围环境的种群数量的改变,并释放特定信号分子或自体诱导物(Autoinducer,AI)启动相关基因表达,改变细菌的生物学功能如生物发光、抗生素的合成、质粒结合转移、被膜形成、细菌毒力因子表达等,从而适应环境变化在菌群竞争?

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