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人胱抑素C参考物质制备方法的建立  
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【英文篇名】 Expression and purification of recombinant cystatin C in Escherichia coli
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【作者】 邹丽辉; 王萌; 黄薇; 张恩毅; 肖飞; 王玉梅; 张传宝;
【英文作者】 Lihui Zou; Meng Wang; Wei Huang; Enyi Zhang; Fei Xiao; Yumei Wang; Chuanbao Zhang; The MOH Key Laboratory of Geriatrics; National Center of Gerontology; Beijing Hospital; Department of Biomaterials; National Institute for Food and Drug Control; National Center for Clinical Laboratories;
【作者单位】 卫生部老年医学重点实验室; 北京医院国家老年医学中心; 中国食品药品检定研究院生物材料室; 卫生部临床检验中心;
【文献出处】 生物技术 , Biotechnology, 编辑部邮箱 2018年 05期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 人胱抑素C蛋白; 重组蛋白表达; 参考物质;
【英文关键词】 cystatin C; recombinant protein expression; reference material;
【摘要】 [目的]建立重组人胱抑素C(cystatin C)表达体系,获得可溶、稳定、高纯度的胱抑素C。[方法]密码子优化并人工合成人胱抑素C编码序列,与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至PRSF-Duet载体以构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒。使用大肠杆菌E. coli BL21(DE3) p Lys S对其进行诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度和分子量,全自动生化仪测定纯化蛋白浓度及稳定性。[结果]成功构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒并诱导表达,胱抑素C蛋白浓度可达500 mg/L,纯度可达90%,在4℃和-20℃储存条件下监测64 w,胱抑素C蛋浓度稳定,均在允许相对偏差5%以内。[结论]通过密码子优化,成功获得浓度为500 mg/L、纯度为90%、存储稳定性至少达到64 w的胱抑素C蛋白,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。
【英文摘要】 [Objective]To construct optimized human cystatin c expression system,and obtain a soluble,stable and high purity recombinant cystatin C.[Methods]The optimized human cystatin C gene was synthesized and cloned into pRSF-Duet vector with MBP residue to generate p MBP-CYSC PRSF expression vector. Recombinant human cystatin C protein was expressed in E. coli BL21( DE3) p Lys S,the protein purity and molecular weight were identified by SDS-PAGE,the concentration of the purified human cystatin C was analyzed by hi...
【基金】 北京市自然科学基金项目(“NO-s GC-c GMP信号通路通过线粒体自噬参与血管损伤修复的机制研究”,No.7172193); 国家重大新药创制国家科技重大专项(“重大疾病新药临床评价技术平台建设”,No.2017ZX09304026); 国家自然科学基金项目(“c GMP信号通路对血管重构调控的分子机制研究”,No.81571384)
【更新日期】 2018-11-21
【分类号】 R91;Q78
【正文快照】 胱抑素C是由CST3基因编码的一种小分子蛋白质,其分子质量为13000。胱抑素C通常由体内有核细胞恒定产生,广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中,仅经肾小球滤过而被清除,其血中浓度由肾小球滤过率决定,因此胱抑素C是评价肾小球滤过率变化的理想指标[1-2]。肾脏功能主要由肾小球?

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