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三疣梭子蟹PtToll-1受体的原核表达及组织、细胞分布研究  
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【英文篇名】 PROKARYOTIC EXPRESSION OF THE TOLL RECEPTOR PTTOLL-1 AND ITS CELLULAR DISTRIBUTION IN PORTUNUS TRITUBERCULATUS
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【作者】 张丹枫; 王国良; 杨宁; 张鑫; 周素明; 刘顺;
【英文作者】 ZHANG Dan-Feng; WANG Guo-Liang; YANG Ning; ZHANG Xin; ZHOU Su-Ming; LIU Shun; Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology; Ministry of Education; School of Marine Science; Ningbo University; Marine Science and Engineering College; Qingdao Agricultural University;
【作者单位】 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室; 青岛农业大学海洋科学与工程学院;
【文献出处】 水生生物学报 , Acta Hydrobiologica Sinica, 编辑部邮箱 2018年 02期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 三疣梭子蟹; Toll受体; 胞外结构域; 原核表达; 组织分布; 真核表达; 细胞定位;
【英文关键词】 Portunus trituberculatus; Toll receptor; Ectodomain; Prokaryotic expression; Tissue distribution; Eukaryotic expression; Cell localization;
【摘要】 为深入研究三疣梭子蟹Toll受体的功能,在前期工作的基础上构建了Pt Toll-1胞外结构域原核表达载体,并成功获得其重组蛋白。将获得的重组蛋白免疫小鼠获得抗此重组蛋白免疫抗血清用于后续研究。SDSPAGE结果表明,体外诱导表达重组蛋白r Pt Toll-1以包涵体的形式出现在大肠杆菌裂解液的沉淀中,分子量大小约为87.18 k D;Western-Blot分析表明,小鼠抗血清能与r Pt Toll-1特异性结合。利用免疫荧光及细胞免疫化学方法对三疣梭子蟹Pt Toll-1在消化道、肝胰腺、鳃、心脏和肌肉等组织及血淋巴细胞中的分布进行研究。此外成功构建Pt Toll-1完整蛋白的真核表达载体p EGFP-N2-Pt Toll-1,并转染HEK293T细胞研究其在哺乳动物细胞HEK293中的表达。组织免疫荧光结果显示,Pt Toll-1在三疣梭子蟹消化道、肝胰腺、鳃、心脏及肌肉等组织中均有分布,但在鳃及消化道的组织结构中表达较强;细胞免疫荧光及免疫化学结果均表明Pt Toll-1主要分布在血淋巴的细胞膜上;激光共聚焦显微技术观察发现,p EGFP-Pt Toll-1融合蛋白也主要在HEK-293T细胞膜上表达。...
【英文摘要】 Toll like receptors known as pathogen-associated molecular pattern(PAMPs) recognize microbe-specific immune elicitors and play fundamental roles in pathogen recognition and the activation of innate immunity. To better understand the functions of Pt Toll-1 in Portunus trituberculatus, the ectodomain of Pt Toll-1 was sequenced and subcloned into the expression vector, and the expressed recombinant ectodomain of Pt Toll-1 was obtained. The polyclonal antibody against r Pt Toll-1 was obtained from immunized mic...
【基金】 国家自然科学基金(41476124); 浙江省自然科学基金(LY17C190005); 宁波市科技计划项目(2016C10037); 宁波大学“水产”浙江省重中之重开放基金(xkzsc1404); 浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划(2016R405043)资助~~
【更新日期】 2018-04-24
【分类号】 S917.4
【正文快照】 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)隶属甲壳纲(Crustacea),十足目(Decapoda),梭子蟹科(Por-tunidae),梭子蟹属(Portunus),俗称白蟹、枪蟹等,广泛分布于中国、朝鲜、日本及马来西亚群岛等海域,在我国是一种主要的海产经济蟹类[1]。因其养殖产量较高,肉质鲜美,营养丰富,经济?

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