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【英文篇名】 |
Expression and Analysis of Pentavalent Nanobody against Ochratoxin A |
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【下载频次】 |
★★★★★ |
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【作者】 |
张俊毅;
陈敏达;
涂追;
许杨;
邓建中;
李燕萍; |
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【英文作者】 |
ZHANG Jun-yi;
CHEN Min-da;
TU Zhui;
XU Yang;
DENG Jian-zhong;
LI Yan-ping;
Institute of Food Science and Technology;
Nanchang University;
State Key Laboratory of Food Science and Technology;
Sino-Germ any Joint Research Institute; |
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【作者单位】 |
南昌大学食品学院;
南昌大学食品科学与技术国家重点实验室;
南昌大学中德联合研究院; |
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【文献出处】 |
食品工业科技
, Science and Technology of Food Industry, 编辑部邮箱
2018年 21期
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
赭曲霉毒素A;
纳米抗体;
霍乱毒素B亚基;
原核表达; |
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【英文关键词】 |
ochratoxin A;
nanobody;
B subunit of Cholera toxin;
prokaryotic expression; |
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【摘要】 |
利用霍乱毒素B亚基(B subunit of Cholera toxin,CTB)能自组装形成五元环状结构,将霍乱毒素B亚基与纳米抗体(VHH28)进行融合从而达到纳米抗体多聚化的目的。将重组载体p ET25b(+)-CTB-VHH28转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,对诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,SDS-PAGE凝胶电泳分析融合蛋白表达情况。结果显示CTB-VHH28为可溶表达,其中单体分子量大小约30 kDa,五聚体分子量大小约150 kDa,均与预测的分子量大小一致;确定了其最优表达条件为:IPTG浓度为0.05 mmol/L,诱导温度为16℃,诱导时间为10 h。经过镍柱纯化后成功得到了纯度较高的五价纳米抗体,表达量为20 mg/L。对其活性进行测定,结果表明CTB-VHH28能与赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)特异性结合,在2.5%甲醇条件下,间接竞争ELISA半抑制浓度(IC_(50))为0.38 ng/mL。热稳定性及甲醇耐受性结果显示,CTB-VHH28在25~55℃具有良好的热稳定性,反应体系中甲醇浓度低于20%时,竞争抑制率变化不大,具有较好... |
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【英文摘要】 |
B subunit of Cholera toxin canself-assemble to form a five-membered structure and be fused with nanobody toachieve the purpose of multi-nanobody.The constructed expression vector p ET25b(+)-CTB-VHH28 was transformed into Escherichia.coli BL21(DE3)and induced with IPTG for expression.The IPTG concentration,expression temperature and expression time were optimized and the obtained recombinant proteins were subjected to SDS-PAGE.SDS-PAGE assay was used to analyze recombinant protein expression,and the molecula... |
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【基金】 |
国家自然科学基金(31471648);
江西省科研攻关计划(20171BBG70072) |
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【更新日期】 |
2018-12-10 |
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【分类号】 |
TS207.5 |
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【正文快照】 |
引文格式:张俊毅,陈敏达,涂追,等.抗赭曲霉毒素A五价纳米抗体的表达及分析[J].食品工业科技,2018,39(21):224-229.赭曲霉毒素(ochratoxin)是由曲霉菌属(Aspergillus)和青霉菌属(Penicillium)的某些种产生的次级代谢产物,包含7种结构类似的化合物[1-2]。其中赭曲霉毒素A(ochrato |
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