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CA50靶向抗体文库的构建筛选及应用评价  
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【英文篇名】 Construction and screening of CA50 targeted antibody library and establishment of immunoassay system
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【作者】 杜鲁涛; 赵巧辉; 田晓平; 吴学炜; 付光宇; 渠海; 苗拥军; 王丽丽; 郑桂喜; 郭海洋; 李桂林; 王传新;
【英文作者】 DU Lutao; ZHAO Qiaohui; TIAN Xiaoping; WU Xuewei; FU Guangyu; QU Hai; MIAO Yongjun; WANG Lili; ZHENG Guixi; GUO Haiyang; LI Guilin; WANG Chuanxin; Department of Clinical Laboratory; The Second Hospital of Shandong University; Tumor Marker Detection Engineering Laboratory of Shandong Province; Zhengzhou Immuno Bio-Tech Co.; Ltd; Autobio Diagnostics Co.; Qilu Hospital of Shandong University; Princess Margaret Cancer Centre/University Health Network;
【作者单位】 山东大学第二医院检验医学中心; 山东省肿瘤标志物检测工程实验室; 郑州伊美诺生物技术有限公司; 郑州安图生物工程股份有限公司; 山东大学齐鲁医院检验医学中心; 玛格丽特公主癌症中心/大学健康网络;
【文献出处】 山东大学学报(医学版) , Journal of Shandong University(Health Sciences), 编辑部邮箱 2018年 10期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 CA50靶点; 诊断; 抗体库; 评价;
【英文关键词】 CA50 targets; Diagnosis; Antibody library; Evaluation;
【摘要】 目的获得针对CA50靶点的高亲和力、高特异性抗体,建立体外诊断CA50检测试剂盒,提高肿瘤诊断的特异性和灵敏度。方法 PCR技术获得单链抗体(ScFv)基因并克隆入pcomb3XSS噬粒载体,通过电转化获得ScFv噬菌体抗体库。用CA50特性识别表位LST a(唾液酸化-乳糖-N-四糖a)的抗原淘洗筛选,获得针对CA50靶点的特异性抗体基因序列。随机挑选克隆测序,验证ScFv抗体库的多样性。利用重叠PCR技术获得人鼠嵌合抗体基因,经过抗体表达纯化及配对筛选建立双抗体夹心法CA50检测试剂盒。同时收集临床诊断阳性样本54例和临床阴性对照样本146例,利用该研究建立的CA50检测试剂盒与罗氏CA50试剂盒进行平行对照,评价其检测相关性。结果建立噬菌体抗体库的容量为2. 5×108,具有较好的多样性。24个PCR鉴定阳性克隆测序,结果为20个正确插入且插入序列均不相同。经过3轮淘洗筛选出5个阳性克隆,经过抗体配对筛选建立的CA50试剂盒临床样本检测结果与罗氏的临床相关性(r=0. 98)。结论通过噬菌体展示抗体库技术成功筛选出了针对CA50的高特异性、高亲和力抗体,为CA50检测在相关肿瘤辅助诊断中的应用提供可能性...
【英文摘要】 Objective To obtain antibodies against CA50 antigen with high affinity and specificity,and to establish a diagnostic kit so as to enhance the specificity and sensitivity of the diagnosis of tumor related diseases. Methods The mouse single chain antibody( ScFv) genes were obtained by PCR and cloned into pcomb3 XSS phagemids. ScFv phage antibody library was obtained by electrotransformation. CA50 antigen containing epitope LST a( sialic acid lactose-N-four sugar a) was used for the elutriation screening. Rand...
【基金】 山东省重点研发(重点产业关键技术)(2016CYJS01A02)
【更新日期】 2018-10-29
【分类号】 R392-33
【正文快照】 CA50又称糖类抗原50、癌抗原50,是一种唾液酸脂和唾液酸糖蛋白[1]。正常细胞表面的糖脂或糖蛋白在细胞信息传递、生长和分化过程中起重要的作用[2-5]。当细胞恶变时,由于糖基转化酶失去活性或胚胎期的转化酶重新激活导致细胞表面糖结构发生改变和抗原性质改变,而成为生物肿瘤标

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