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金鱼HSC70和HSP40基因克隆及其原核表达  
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【英文篇名】 Cloning and prokaryotic expression of genes HSC70 and HSP40 in goldfish
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【作者】 金新萍; 谢倩; 吕斌; 曹诣斌;
【英文作者】 JIN Xin-ping; XIE Qian; LYU Bin; CAO Yi-bin; College of Chemistry and Life Science; Zhejiang Normal University;
【作者单位】 浙江师范大学化学与生命科学学院;
【文献出处】 南方农业学报 , Journal of Southern Agriculture, 编辑部邮箱 2018年 02期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 金鱼; HSC70基因; HSP40基因; 克隆; 原核表达载体;
【英文关键词】 goldfish; gene HSC70; gene HSP40; clone; prokaryotic expression vector;
【摘要】 【目的】克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础。【方法】提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩增金鱼HSC70和HSP40基因,将目的基因片段克隆至线性空表达载体p ET-32a上构建原核表达载体p ET-32a-HSC70和p ET-32a-HSP40,转化大肠杆菌Rosetta表达菌株后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白。【结果】金鱼HSC70基因CDS序列全长1950 bp,编码650个氨基酸;金鱼HSP40基因CDS序列全长996 bp,编码332个氨基酸。金鱼HSC70氨基酸序列与斑马鱼、人类、家鼠、金线鲃和草鱼的相似度分别为96.28%、95.50%、95.35%、98.15%和98.61%;HSP40氨基酸序列与斑马鱼的完全一致(相似度100.00%),与普通鲤鱼、金线鲃、人类和家鼠的相似度均为94.12%。原核诱导表达获得的融合蛋白TrxHSC70和Trx-HSP...
【英文摘要】 【Objective】Heat shock cognate protein 70 gene(HSC70)and heat shock protein 40 gene(HSP40)of goldfish were cloned,their prokaryotic expression vectors were constructed and induced by IPTG to obtain target proteins,and the biological functions of proteins HSC70 and HSP40 were surveyed to laid the foundation for revealing the mechanism of high-temperature response of goldfish.【Method】Genes HSC70 and HSP40 were amplified from total RNA isolated from goldfish liver tissues using RT-PCR. The target gene fragments...
【基金】 国家自然科学基金项目(KJZKJY13088)
【更新日期】 2018-04-19
【分类号】 S917.4
【正文快照】 0引言【研究意义】热激同源蛋白70(HSC70)是70 k D热休克蛋白家族(Hsp70)的成员之一,与细胞分化、发育密切相关,为组成型表达蛋白(Gourdon et al.,2000)。HSC70存在于所有原核及真核生物细胞中,在正常情况下稳定表达,主要参与新生肽链的折叠与组装及蛋白前体转运;在环境胁迫因?

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