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蛋白转导结构域4-铜/锌-超氧化物歧化酶融合蛋白的制备及其穿细胞膜的功能研究  
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【英文篇名】 Preparation of Fusion Protein PTD4-Cu/ZnSOD and verification of its ability to penetrate the cell membrance
【下载频次】 ★★☆
【作者】 王宇; 刘菊英; 王贤裕; 柯昌斌; 李瑞明; 王晓勋;
【英文作者】 WANG Yu; LIU Juying; WANG Xianyu; KE Changbin; LI Ruiming; WANG Xiaoxun; Department of Anesthesiology; Taihe Hospital; Hubei University of Medicine; Institute of Biomedicine;
【作者单位】 十堰市太和医院湖北医药学院附属医院麻醉科; 十堰市太和医院湖北医药学院附属医院生物医学研究所;
【文献出处】 安徽医药 , Anhui Medical and Pharmaceutical Journal, 编辑部邮箱 2018年 02期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 铜/锌-超氧化物歧化酶; 蛋白转导结构域; 心肌细胞;
【英文关键词】 Cu/ZnSOD; PTD; cardiomyocytes;
【摘要】 目的拟构建蛋白转导结构域(PTD)4-铜/锌-超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)原核表达质粒,纯化制备PTD4-Cu/ZnSOD融合蛋白,探讨其穿膜能力。方法设计合成hCu/ZnSOD引物,扩增hCu/ZnSOD cDNA片段;采用PCR靶向克隆法将扩增产物与含有相同酶切位点载体质粒PET16b-PTD4进行重组,扩增质粒,双酶切鉴定和DNA测序;获得PET16b-PTD4-Cu/ZnSOD(CDs)原核表达载体,导入感受态E.coli BL21(DE3)中,进行扩增培养,收集菌体,将其裂解离心、Ni_2~+亲和层析、收集目的蛋白。融合蛋白孵育人心肌细胞,免疫荧光法检测融合蛋白穿膜能力。结果通过测序证实实验扩增所得的PTD序列与设计的预期序列一致。设计并简并PTD4-Cu/ZnSOD基因长度为567 bp,通过引物进行正反向测序证实该序列与已被登录的GENBANK中Cu/ZnSOD序列相一致,并构建了相应的原核表达质粒。并在E.coli BL21进行大量表达,最终收集的PTD4-Cu/ZnSOD具有良好水溶性。SDS-page分析显示构建的PTD4-Cu/ZnSOD分子量约为20 kDa,与预期的蛋白分子量2...
【英文摘要】 Objective This study is aimed to construct prokaryotic expression plasmid PTD4-Cu/ZnSOD and purify PTD4-Cu/ZnSOD fusion protein,to explore the property of intercellular transport. Methods The primers of hCu/ZnSOD were designed and synthesized to amplify full-length hCu/ZnSOD cDNA by PCR cloning assay. After double-enzyme digestion, the linearized PET16 b-PTD4 and hCu/ZnSOD cDNA was ligated with PCR cloning reaction to construct PET16 b-PTD4-Cu/ZnSOD. The recombinant plasmid was verified by PCR and DNA seque...
【基金】 国家自然科学基金项目(81171783)
【更新日期】 2018-03-14
【分类号】 R54
【正文快照】 铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)是一种广泛存在于真核生物细胞质及过氧化物酶体中的大分子蛋白,是机体内主要的具有特异性的内源性氧自由基清除剂[1]。因此增加细胞内Cu/ZnSOD水平有望成为防治缺血再灌注损伤的有力措施之一,但由于Cu/ZnSOD在细胞膜上没有专一受体或通道,外源性

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