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用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列  
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【英文篇名】 Rapidly cloning gene sequence of the uricase from Bacillus fastidious by degenerated primer
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【作者】 赵运胜; 卜友泉; 廖飞;
【英文作者】 Zhao Yunsheng; Bu Youquan; Liao Fei; Department of Clinical Laboratory; the First Hospital of Qinhuangdao; Teaching and Research Section of Biochemistry and Molecular Biology; College of Basic Medical Sciences; Chongqing Medical University; Key Laboratory of Clinical Laboratory Diagnostics; College of Laboratory Medicine;
【作者单位】 秦皇岛市第一医院检验科; 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室; 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室;
【文献出处】 重庆医科大学学报 , Journal of Chongqing Medical University, 编辑部邮箱 2017年 02期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 苛求芽孢杆菌尿酸酶; 简并引物PCR; 基因测序;
【英文关键词】 Bacillus fastidious uricase; degenerated primer PCR; gene cloning;
【摘要】 目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物进行PCR扩增;将所得片段连接到T载体,转化后筛选阳性克隆测序。结果:据密码子偏好性调整简并引物,获得该尿酸酶从第六位氨基酸到终止密码子之间的编码序列;此尿酸酶共含322个氨基酸残基,原核尿酸酶靠近N端的保守序列ATDSMKNFI从该尿酸酶第70位氨基酸残基左右开始,另一保守序列GKVYTEPR从该尿酸酶第290位氨基酸残基开始但变为GAVFTEPR。结论:用简并引物PCR快速克隆获得了苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列。
【英文摘要】 Objective:To clone the whole encoding sequence of the uricase from Bacillus fastidious. Methods:According to the N-terminus amino sequence AERTMFYGKGDV from Edman degradation,bacterial uricases bearing similar N-terminus were sought in NCBI database by BLASTp;through multiple sequence alignment,two short conserved peptide fragments were found,one close to the N-terminus while the other close to the C-terminus. Using the known N-terminus and two conserved peptides,degenerated primers were designed for clonin...
【更新日期】 2017-03-14
【分类号】 R440
【正文快照】 血清尿酸测定是临床检验的常规项目;尿酸酶法是测定血清尿酸的基本方法[1]。现有尿酸酶法中,偶联过氧化物酶的间接终点平衡法最常用,但受血清中还原物质、过氧化物及黄嘌呤等显著干扰,所需显色剂毒害性较大[2-5]。本实验室建立了分析293 nm吸收变化测定血清尿酸的动力学尿酸酶?

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