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绿盲蝽AlEcR-A的单克隆抗体制备及在外源20E诱导下的应答  
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【英文篇名】 Preparation of Monoclonal Antibody Against Al EcR-A Protein and Its Response Induced by Exogenous 20-Hydroxyecdysone in Apolygus lucorum
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【作者】 谭永安; 肖留斌; 郝德君; 赵静; 孙洋; 柏立新;
【英文作者】 TAN YongAn; XIAO LiuBin; HAO DeJun; ZHAO Jing; SUN Yang; BAI LiXin; Institute of Plant Protection; Jiangsu Academy of Agricultural Sciences; College of Forestry; Nanjing Forestry University;
【作者单位】 江苏省农业科学院植物保护研究所; 南京林业大学林学院;
【文献出处】 中国农业科学 , Scientia Agricultura Sinica, 编辑部邮箱 2017年 01期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 绿盲蝽; 蜕皮激素受体; 20-羟基蜕皮酮; 单克隆抗体; 表达量;
【英文关键词】 Apolygus lucorum; ecdysone receptor; 20E; monoclonal antibodies; expression level;
【摘要】 【目的】获得绿盲蝽(Apolygus lucorum)蜕皮激素受体(A1EcR-A)原核表达的重组蛋白,制备单克隆抗体,分析绿盲蝽AlEcR-A在外源蜕皮激素(20E)诱导下mRNA及蛋白表达量的变化趋势,为进一步研究EcR的功能奠定前期基础,同时也为构建20E信号传导的网络图谱提供理论依据。【方法】在前期获得绿盲蝽AlEcR-A的基础上,将含有其基因的T载体经NdeⅠ和XbaⅠ双酶切,构建AlEcR-A原核表达载体(pCzn1-AlEcR-A),将该表达载体经IPTG诱导表达和蛋白Ni-IDA亲和纯化,以获得AlEcR-A基因功能区的纯化蛋白。进一步用其进行免疫反应,取小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,采用间接ELISA及Western blot筛选验证是否为目的抗体,通过抗体纯化,Western blot检测该抗体能否特异性结合AlEcR-A重组蛋白及绿盲蝽总蛋白,从而制备得到AlEcR-A蛋白单克隆抗体。最后利用RT-PCR及Western blot方法,进行20E微注射绿盲蝽2龄若虫,分析8 d内AlEcR-A的mRNA及蛋白含量的变化,明晰20E诱导下AlEcR-A的应答反应。【结果】经Nd...
【英文摘要】 [Objective]The objectives of this study are to prepare the monoclonal antibody against ecdysone receptors protein and clarity the response of AlEcR-A under exogenous ecdysterone hormone(20E)in Apolygus lucorum.[Method]The vector containing AlEcR-A was double enzyme restricted by Nde I and Xba I,then the cDNA identified by sequencing was constructed to pCzn1 vector and transformed into Arctic express of E.coli.The target recombinant protein has over expressed and has been purified by using Ni-NTA agarose.BAL...
【基金】 国家科技支撑计划(2012BAD19B05); 国家自然科学基金(31301668); 国家现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-18-16); 转基因棉花环境安全性评价技术(2016ZX08011); 江苏省农业科学院院基金(611613); 江苏省农业科技自主创新资金(CX(14)5026)
【更新日期】 2017-01-24
【分类号】 S433
【正文快照】 0 引言 【研究意义】自20世纪90年代转Bt基因棉花在中国大面积商业种植以来,其靶标鳞翅目害虫如棉铃虫(Helicoverpa armigera)等得到有效控制,棉田化学农药的施用频率及使用量大幅度降低,从而使得棉田害虫的生态位发生了一系列的演替变化,绿盲蝽(Apolygus lucorum)已上升成为?

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