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【英文篇名】 |
Establishment and evaluation of a chemiluminescence immunoassay for efficient detection of human procalcitonin |
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【下载频次】 |
★★★★★ |
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【作者】 |
羊婷婷;
余易展;
刘培;
王念超;
卢彦;
黄亚红; |
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【英文作者】 |
YANG Ting-ting;
YU Yi-zhan;
LIU Pei;
WANG Nian-chao;
LU Yan;
HUANG Ya-hong;
School of Life Sciences;
State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology;
Nanjing University; |
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【作者单位】 |
南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室; |
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【文献出处】 |
中国病原生物学杂志
, Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱
2017年 04期
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
单克隆抗体;
人降钙素原(PCT);
双抗体夹心;
定量检测; |
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【英文关键词】 |
monoclonal antibody;
human procalcitonin(PCT);
double anti-sandwich;
quantitative detection; |
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【摘要】 |
目的重组原核表达人降钙素原(PCT)蛋白,制备抗人PCT单克隆抗体,建立高效检测PCT化学发光免疫分析方法。方法根据NCBI提供的PCT基因序列,按照大肠埃希菌偏爱密码子优化后进行全基因合成,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切将其构建到pET32a载体上;将pET32a-PCT质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用Western blot法分析重组蛋白表达情况;用镍亲和纯化柱纯化重组蛋白,以此为抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化后再用间接ELISA法筛选阳性单克隆细胞;将阳性单克隆细胞接种于小鼠腹腔内,制备腹水单抗,经Protein A/G纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,采用间接ELISA方法对抗体的特异性、灵敏度以及亲和力进行鉴定;用NaIO4氧化HRP法标记单克隆抗体,通过棋盘法筛选配对单克隆抗体,以筛选的配对抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心化学发光免疫分析的血清学检测体系,检测临床150例血清标本,其中PCT升高(>0... |
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【英文摘要】 |
Objectives To construct a vector for prokaryotic expression of the human procalcitonin(PCT)gene,to express it in Escherichia coli,to prepare anti-human PCT monoclonal antibodies,and to establish and evaluate a chemiluminescence immunoassay for efficient detection of human PCT. Methods In accordance with the sequence of the PCT gene published by the NCBI,the gene sequence was optimized based on the codon preference of E.coli.Restriction sites and protective bases were added to the gene sequence,and then the ... |
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【基金】 |
国家自然科学基金项目(No.J1210026);
江苏省自然科学基金项目(No.BK20161408) |
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【更新日期】 |
2017-06-07 |
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【分类号】 |
R392 |
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【正文快照】 |
降钙素原(procalcitonin,PCT)是无激素活性的降钙素(calcitonin,CT)前肽物质,正常生理情况下由甲状腺C细胞合成,在健康个体血清中的浓度为10~50pg/ml[1]。当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时,患者血浆中的PCT水平升高[2]。目前PCT主要应用在鉴别诊断细? |
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