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Crispr/Cas9技术在CHO细胞中进行基因定点敲入的应用  
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【英文篇名】 Application of Crispr/Cas9 Technology in Targeted Gene Integration in CHO cells
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【作者】 王佳贤; 赵梦琳; 丁凯; 路慧丽; 朱建伟;
【英文作者】 WANG Jiaxian; ZHAO Menglin; DING Kai; LU Huili; ZHU Jianwei; Engineering Research Center of Cell and Therapeutic Antibody; Ministry of Education; School of Pharmacy; Shanghai Jiaotong University;
【作者单位】 上海交通大学药学院; 细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心;
【文献出处】 中国医药工业杂志 , Chinese Journal of Pharmaceuticals, 编辑部邮箱 2017年 01期  
期刊荣誉:ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 Crispr/Cas9技术; 基因定点整合; 中华仓鼠卵巢细胞; 重组细胞株稳定性;
【英文关键词】 Crispr/Cas9 technology; targeted gene integration; Chinese hamster ovary cell; cell line stability;
【摘要】 工业生产中,哺乳动物细胞是重组蛋白类药物最常用的表达系统之一,但重组细胞株经常在表达量及产品质量方面不尽理想。在基因组中定点整合外源基因则可以极大地改善细胞株的生产能力及产品质量。Crispr/Cas9技术是近年发展起来的基因编辑技术,在动植物细胞中得到了广泛应用。基于已有文献和本实验室经验,本文主要介绍了Crispr/Cas9技术在工业生产常用细胞系中华仓鼠卵巢细胞(CHO)中进行基因定点整合的方法,并介绍了应用Crispr/Cas9技术进行基因定点敲入的案例。
【英文摘要】 Mammalian cells are the most widely used hosts for the production of industrial biopharmaceuticals. However, recombinant cell lines often exhibit low expression and instability during culture period. In order to circumvent such a situation, targeted gene integration is designed to optimize product expression. Crispr/Cas9 technology is a newly developed gene editing tool and has been widely used in animals, plants and mammalian cells. In this work, we described a universal protocol as well as some cases usin...
【基金】 国家自然科学基金项目(81273576、81473127)
【更新日期】 2017-02-28
【分类号】 Q78
【正文快照】 中华仓鼠卵巢细胞(CHO)具有良好的翻译后修饰系统,能够表达人体内具有生物学活性的重组蛋白质,是哺乳动物细胞表达系统中最常用的宿主细胞[1]。目前构建表达生产用重组CHO细胞株主要是通过随机整合的方式,即通过将目的基因随机整合到CHO细胞的基因组中,采用加药筛选的方式挑出?

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