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犬细小病毒的新型原液荧光定量PCR方法的建立  
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【英文篇名】 Establishment of one-step quantitative PCR methods for detection of canine parvovirus in clinical samples
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【作者】 曹雪峰; 弓超; 王文博; 陈锚锚; 杨显君; 郭平; 范泉水; 钟志军; 邱薇;
【英文作者】 CAO Xue-feng; GONG Chao; WANG Wen-bo; CHEN Mao-mao; YANG Xian-jun; GUO Ping; FAN Quan-shui; ZHONG Zhi-jun; QIU Wei; Center for Disease Control and Prevention of Chengdu Military Region; College of Veterinary Medicine; Sichuan Agricultural University;
【作者单位】 成都军区疾病预防控制中心; 四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室;
【文献出处】 中国兽医科学 , Chinese Veterinary Science, 编辑部邮箱 2017年 02期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 犬细小病毒; TaqMan荧光定量PCR; 样品上清;
【英文关键词】 canine parvovirus; TaqMan quantitative PCR; specimens supernatant;
【摘要】 为建立一种不提取病毒DNA,直接采用样本上清液检测犬细小病毒(CPV)的TaqMan荧光定量PCR方法,通过扩增CPV NS基因部分片段构建重组质粒,建立TaqMan荧光定量PCR方法;对建立的方法进行反应条件、特异性、敏感性的检测;通过建立的方法对核酸荧光定量PCR和原液荧光定量PCR进行对比;最后对临床中疑似的CPV病例进行检测。结果显示,建立的方法特异性好,对犬常见病毒无扩增。该方法检测的灵敏度达101copies/L,该方法的批内变异系数为0.09%~1.30%,批间变异系数为0.57%~0.94%,重复性良好。核酸荧光定量PCR和原液荧光定量PCR的最低检测浓度均可以达到101 copies/L,且原液荧光定量PCR的产物浓度约为核酸荧光定量PCR的7倍,提示核酸在提取过程中有大量的损耗。对187份临床病料进行检测,建立的方法共检出128份阳性,与普通PCR和胶体金快速检测板的阳性符合率均为100%,核酸法与原液法的符合率为100%。因此,本试验建立的CPV病料原液TaqMan荧光定量PCR方法与普通PCR和胶体金快速检测板相比,具有阳性检出率更高、准确率更好的特点。
【英文摘要】 In this study we developed a direct TaqMan quantitative PCR(direct-q PCR) method using Taqman probes for detection of canine parvovirus(CPV), this method did not extract nucleic acids. Direct-q PCR method was established by constructing recombinant plasmid. The reaction condition, specificity and sensitivity of this method were optimized. Clinical samples were collected and used for verification of this method. The result showed that the method had good specificity, with no amplification of common viruses i...
【基金】 国家公益性行业(农业)科研重大专项(201303042); 全军医学科技青年培育项目(14QNP057); 成都大熊猫繁育研究基金会项目(CPF2015-4)
【更新日期】 2017-03-16
【分类号】 S852.655
【正文快照】 titative PCR and direct-q PCR both reached to 101copies/L,and the concentration of direct-q PCR pro-duction was 7 times than that of direct-q PCR,indicating that the process of nucleic acid extractionhas lost many nucleic acids.187 clinical materials were

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