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一个新的L-半胱亚磺酸脱羧酶基因的分析和突变  
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【英文篇名】 Protein engineering by random mutagenesis and analysis of a metagenome-derived cysteine sulfinate decarboxylase
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【作者】 邓洁; 吴巧芬; 高华; 徐悦; 欧倩; 武波; 蒋承建;
【英文作者】 Jie Deng; Qiaofen Wu; Hua Gao; Yue Xu; Qian Ou; Bo Wu; Chengjian Jiang; State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources; College of Life Science and Technology; Guangxi University;
【作者单位】 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西大学生命科学与技术学院;
【文献出处】 微生物学报 , Acta Microbiologica Sinica, 编辑部邮箱 2017年 08期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 牛磺酸; L-半胱亚磺酸脱羧酶; 宏基因组文库; 连续易错PCR技术; 突变酶;
【英文关键词】 taurine; L-cysteine sulfinate decarboxylase; metagenomic library; sequential error-prone PCR; mutation;
【摘要】 【目的】完成一个来源于碱性污染土壤宏基因组文库的新的L-半胱亚磺酸脱羧酶基因undec1A的鉴定,研究其酶学性质并利用非理性设计技术对其进行分子改造。【方法】以p ETBlue-2为表达载体构建包含undec1A基因的重组表达质粒,转化至宿主细胞E.coli Tuner(DE3)p Lac?中构建重组表达克隆,采用镍亲和层析完成了酶蛋白的分离纯化,完成其生化特征研究,利用连续易错PCR技术对Undec1A蛋白进行分子改造。【结果】生物信息学分析结果揭示Undec1A蛋白与已知的L-半胱亚磺酸脱羧酶存在类似的辅酶结合位点和底物识别催化基序等。分子对接结果显示氨基酸残基Val237、Asp239、Asp266、Ile267、Ala268和Lys298等决定了与底物分子L-半胱亚磺酸的识别和结合催化。以L-半胱亚磺酸作为底物,重组Undec1A蛋白的最适作用p H为7.0,最适作用温度为35°C;分子动力学常数K_m为(1.557±0.015)mmol/L,V_(max)为(49.07±3.19)μmol/(L·min),k_(cat)为(45.80±1.32)/min。利用连续易错PCR技术完成了亲本酶的分子改造...
【英文摘要】 [Objective] The aim of this study was to identify a novel L-cysteine sulfinate decarboxylase from alkaline polluted soil metagenome and to use non-rational design method to improve the enzyme. [Methods] L-cysteine sulfinate decarboxylase gene undec1 A was cloned into p ETBlue-2 vector and expressed in Escherichia coli Tuner(DE3) p Lac?. The recombinant Undec1 A protein was purified to homogeneity. The original Undec1 A protein was characterized and a mutagenesis library was constructed with sequential error...
【基金】 国家自然科学基金(21262003); 2017年度广西高等教育创优计划教学相关项目-优势特色专业项目(优质本科专业)~~
【更新日期】 2017-08-25
【分类号】 Q55;Q78
【正文快照】 牛磺酸(Taurine)又名牛胆酸,化学名为2-氨基乙磺酸,分子式为C2H7NO3S,结构式为H2N-CH2-CH2-SO3H,是动物体内含量最丰富的游离氨基酸,也是人体必需的氨基酸之一[1]。牛磺酸具有多种独特的生理功能,在消炎、镇痛、解热、降血糖、维持正常视觉机能、调节神经传导和脂类的消化与吸?

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