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hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位  
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【英文篇名】 Construction of eukaryotic expression plasmid of human Sesn3 gene and expression and localization of fusion protein in osteosarcoma cells
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【作者】 沈涛; 郭洲洋; 李妍; 巴根; 陈之光; 郭然; 杨蕾; 付勤;
【英文作者】 Shen Tao; Guo Zhouyang; Li Yan; Ba Gen; Chen Zhiguang; Guo Ran; Yang Lei; Fu Qin; Department of Orthopedic Surgery; Shengjing Hospital of China Medical University; Department of Cell Biology; The Key Laboratory of Cell Biology of Ministry of Education and Public Health of China; College of Basic Medical Sciences; China Medical University;
【作者单位】 中国医科大学附属盛京医院骨科; 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室;
【文献出处】 现代肿瘤医学 , Journal of Modern Oncology, 编辑部邮箱 2017年 17期  
期刊荣誉:ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 hSesn3; Western blot; 绿色荧光蛋白; 质粒构建;
【英文关键词】 hSesn3; Western blot; GFP; plasmid construction;
【摘要】 目的:通过构建人Sesn3真核表达载体同时证实融合蛋白在细胞中的表达及定位。方法:提取Hela工具细胞的mRNA,反转录至c DNA。进一步通过PCR来扩增人Sesn3基因的c DNA全长片段,并将其亚克隆于p EGFP-C1真核表达载体中,进而将构建的重组质粒进行酶切及测序鉴定,转染到MG-63骨肉瘤细胞中,获取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测表达。进一步利用激光共聚焦扫描显微镜方法观察MG-63细胞内p EGFP-h Sesn3的定位,最后利用免疫沉淀方法纯化人源h Sesn3蛋白。结果:h Sesn3基因c DNA全长片段克隆于真核表达载体p EGFP-C1中,酶切鉴定片段为1 410 bp,并成功测序。Western blot检测到了GFP-h Sesn3融合蛋白表达,分子量约为79 k Da。在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3主要定位于细胞质,进一步成功纯化了h Sesn3蛋白。结论:成功构建了h Sesn3基因c DNA全长的真核表达载体,在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3蛋白主要定位于细胞质,最终成功纯化了h Sesn3蛋白。
【英文摘要】 Objective: To construct the expression plasmid of human Sestrin 3( h Sesn3) gene and identify expression and localization of the fusion protein in osteosarcoma MG-63 cells. Methods: Total mRNA was extracted from Hela cells,and the c DNA was reversely transcripted. The h Sesn3 coding sequence was amplified by polymerase chain reaction( PCR) and sub-cloned into p EGFP-C1 empty vector. After the PCR fragment was identified by double restriction enzymes digestion and sequenced,the plasmid was transiently transf...
【基金】 国家自然科学基金资助项目(编号:31201053,81372337)
【更新日期】 2017-08-25
【分类号】 R738.1
【正文快照】 Modern Oncology 2017,25(17):2699-2702【修回日期】2017-03-27Sestrins(Sesns)是一类高度保守的应激蛋白家族,当细胞暴露在不同的环境压力情况下(氧化应激和DNA损伤)Sesns起到保护细胞的作用。其中Sesns主要通过参与调控AMPK和m TOR信号通路维持细胞稳态。近来的研究发现,Ses

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