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人血管内皮生长因子189在毕赤酵母中的表达、纯化及其活性  
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【英文篇名】 Expression of human vascular endothelial growth factor 189 in Pichia pastoris and purification and activity of expressed product
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【作者】 贾恩朝; 夏文娇; 路臣桂; 张会勇; 朱武凌;
【英文作者】 JIA En-chao; XIA Wen-jiao; LU Chen-gui; ZHANG Hui-yong; ZHU Wu-ling; Synthetic Biology Remaking Engineering and Application Laboratory; College of Life Science and Technology; Xinxiang Medical University;
【作者单位】 新乡医学院生命科学技术学院河南省高校合成生物改造工程与应用重点实验室;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2017年 04期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 人血管内皮生长因子189; 毕氏酵母; 纯化; 血管通透性试验; 生物学活性;
【英文关键词】 Vascular endothelial growth factor (VEGF) 189; Pichia pastoris; Purification; Vascular permeability test; Biological activity;
【摘要】 目的在毕赤酵母中表达人血管内皮生长因子189(vascular endothelial growth factor 189,VEGF189),并进行纯化,同时检测其在体外的生物活性。方法以人VEGF183为模板,经重叠PCR法获得VEGF189基因,亚克隆至pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-VEGF189。将其转化至E.coli DH5α中进行扩增,提取质粒,用SacⅠ酶线性化,电转至毕赤酵母GS115中,经4 mg/ml G418-YPD平板筛选高拷贝克隆。采用甲醇进行诱导表达,并通过肝素琼脂糖树脂亲和层析进行纯化。血管通透性试验检测其生物活性。结果经PCR鉴定证明重组表达质粒pPIC9K-VEGF189构建正确。VEGF189蛋白的表达及纯化产物均可与兔抗人VEGF183多克隆抗体发生特异性结合,纯化蛋白纯度达95%以上,浓度为0.291 1 mg/ml,可增加血管的通透性。结论本实验通过酵母表达系统获得了具有活性的VEGF189蛋白,为在体外探讨该蛋白在血管生成中的作用奠定了基础。
【英文摘要】 Objective To express vascular endothelial growth factor(VEGF)189 in Pichia pastoris, purify the expressed product and determine its biological activity in vitro. Methods VEGF183 gene was amplified by overlap PCR using human VEGF183 gene sequence as a template and subcloned to vector pPIC9K. The constructed recombinant plasmid pPIC9K-VEGF189 was transformed to E. coli DH5α for amplification. The plasmid was extracted and linearized with SacⅠ,and transformed to P.pastoris GS115, and high copy clones were scre...
【基金】 河南省重大科技专项研究课题(161100310900); 河南省科技厅基础前沿项目(142300410027); 河南省教育厅(12B320021)
【更新日期】 2017-05-08
【分类号】 R54
【正文快照】 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是目前已知最强的血管生成刺激因子,被认为是治疗冠心病、创伤、糖尿病性下肢缺血等缺血性疾病潜在的理想药物[1-2]。VEGF基因由8个外显子及7个内含子组成,其在表达时由于基因的选择性拼接产生了VEGF121、 VEGF145

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