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HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立  
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【英文篇名】 Recombinant Vector Construction and Stable Cell Line Establishment for Expression of HIV-1 Nef Gene
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【作者】 李苗苗; 杨霄旭; 杨朝霞; 向双林; 韩梅;
【英文作者】 LI Miao-miao; YANG Xiao-xu; YANG Zhao-xia; XIANG Shuang-lin; HAN Mei; College of Life Sciences; Hunan Normal University;
【作者单位】 湖南师范大学生命科学学院;
【文献出处】 湖南师范大学自然科学学报 , Journal of Natural Science of Hunan Normal University, 编辑部邮箱 2017年 01期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 Nef基因; SW480细胞; G418; 稳定细胞系;
【英文关键词】 Nef gene; SW480 cell; G418; stable cell line;
【摘要】 为了构建艾滋病毒HIV-1型Nef基因重组表达载体,利用PCR从p NL4-3质粒上扩增HIV-1型Nef基因,获得Nef基因完整的编码区,构建可表达Nef蛋白的p EB-myc-nef重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染SW480细胞,通过Western Blot技术检测Nef蛋白的瞬时表达.为了建立稳定表达Nef基因的SW480细胞系,采用G418筛选建立稳定表达细胞系的方法,筛选出单克隆细胞系.扩大培养克隆细胞后,通过RT-PCR和Western Blot分别检测Nef的mRNA转录水平及蛋白表达水平,经长达60 d的传代,最终获得稳定表达Nef基因的SW480细胞系,为研究RNAi在艾滋病治疗方面的应用提供了细胞模型.
【英文摘要】 In order to construct the recombinant expression vector and establish the stable SW480 cell line for expression of HIV-1 Nef gene,HIV-1 Nef gene was amplified from the plasmid of p NL4-3 by PCR,and its full ORF was cloned into p EBMulti-neo-myc vector to form the vector p EB-myc-nef. This vector expressing Nef and myc proteins was confirmed by sequencing analysis. The transient expression of Nef in SW480 cells transfected with the recombinant plasmid via LipofectamineTM2000 was then determined by Western Bl...
【基金】 湖南省科技厅重点项目(2014FJ2006); 长沙市科技局重点项目(K1205221-31)
【更新日期】 2017-03-20
【分类号】 R512.91;Q78
【正文快照】 艾滋病(AIDS)全称为“获得性免疫缺陷综合征”,是一种由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的,以全身免疫*通讯作者,E-mail:hanmei@hunnu.edu.cn系统严重损害为特征的传染性疾病.RNA干扰(RNAi)是细胞内序列特异性抑制靶基因表达的机制,具有高效性、特异性和副作用小的特点,将其应用于抗HI

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