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麻疹病毒沪191株反向遗传系统的建立  
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【英文篇名】 Construction of a Reverse-genetics System of Measles Virus Strain S191
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【作者】 张勇侠; 李玫颖; 陈宗香; 李竹石; 杨小勇; 范凤鸣; 刘兰军;
【英文作者】 ZHANG Yongxia; LI Meiying; CHEN Zongxiang; LI Zhushi; YANG Xiaoyong; FAN Fengming; LIU Lanjun; Chengdu Institute of Biological Products Co.; Ltd.;
【作者单位】 成都生物制品研究所有限责任公司;
【文献出处】 病毒学报 , Chinese Journal of Virology, 编辑部邮箱 2017年 04期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 MV-S191; 反向遗传; T7RNA聚合酶; 绿色荧光蛋白(GFP);
【英文关键词】 Measles virus strain Shanghai-191; Reverse genetics; T7RNA polymerase; Green fluorescent protein;
【摘要】 建立麻疹病毒沪191株(MV-_(S191))反向遗传系统。提取MV-_(S191)的RNA,RT-PCR分7段扩增出麻疹病毒反基因组cDNA,通过酶切、连接,拼接出MV-_(S191)全长反基因组,并分别在其3′端和5′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)和锤头核酸酶序列(HamRZ),克隆到pT7-MCS载体,获得pT7MV_(S191)。在MV-_(S191)的P-M基因间区域插入绿色荧光蛋白(GFP),获得pT7MV_(S191)-ATU-GFP,同时构建表达麻疹病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的3个辅助质粒。将pT7MV_(S191)、pT7MV_(S191)-ATU-GFP分别与辅助质粒通过脂质体介导共转染BSRT7细胞,热休克3h。转染3d后,取上清,感染Vero-SLAM细胞。经RT-PCR、显微镜检测绿色荧光蛋白表达及合胞体形成,在该系统中成功拯救到两种有感染活性的病毒。成功建立了MV-_(S191)的反向遗传系统,为以麻疹病毒为载体进行新疫苗的研发奠定了基础。
【英文摘要】 A reverse-genetics system for measles virus strain Shanghai-191(MV-_(S191))was constructed.The genomic RNA of MV-_(S191) was extracted.Seven fragments covering full-length genomic cDNA were amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR).A full length anti-genome was designed to fuse the nucleotide of the viral sequence with hammerhead ribozyme(HamRZ)and hepatitis delta virus ribozyme(HdvRZ)sequence,and then pT7MV_(S191) was constructed.Green fluorescent protein(GFP)with additional tran...
【更新日期】 2017-07-20
【分类号】 R373
【正文快照】 MV-S191是我国麻疹疫苗的生产株之一。已有研究表明:麻疹接种后3~10年以上儿童抗体阳性率高,阳性率80.6%,抗体水平均值为108.42IU/L[1],提示接种麻疹疫苗后远期具有较高的保护性抗体水平,说明MV-S191麻疹疫苗具有良好的免疫原性。MV-S191在鸡胚成纤维细胞中连续传代35代,全基因

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