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一株石油烃降解菌TY22烷烃羟化酶基因的克隆及功能研究  
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【英文篇名】 Cloning and Functional Analysis of Alkane Hydroxylase Gene of a Petroleum Hydrocarbon Degrading Bacteria TY22
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【作者】 唐赟; 敬珊; 邹书珍; 冀黎骏; 杨雪; 余小丽;
【英文作者】 TANG Yun; JING Shan; ZOU Shu-zhen; College of Life Sciences; China West Normal University;
【作者单位】 西华师范大学生命科学学院;
【文献出处】 安徽农业科学 , Journal of Anhui Agricultural Sciences, 编辑部邮箱 2017年 36期  
期刊荣誉:ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 石油烃降解菌; 烷烃羟化酶; 表达; 功能;
【英文关键词】 Petroleum hydrocarbon degrading bacteria; Alkane hydroxylase; Expression; Function;
【摘要】 [目的]对一株石油烃降解菌TY22的烷烃羟化酶基因alkB克隆测序,并对其外源表达和功能进行研究。[方法]PCR扩增获得alkB基因部分序列,再根据该序列通过染色体步移技术,最终获得完整CDS序列。将alkB基因与pET21b(+)载体构建重组质粒,并转入E.coli BL21(DE3)进行表达。再将alkB基因克隆至pCom8载体中,分别转入E.coli GEc137(p GEc47△B)和Pseudomonas fluorescens KOB2Δ1进行基因功能的互补试验。[结果]染色体步移获得了1 236 bp的烷烃羟化酶基因完整CDS序列(Gen Bank Accession:KU867870)。诱导表达发现,重组菌在0.1 mmol/L IPTG、30℃条件下诱导培养6 h的表达效果最佳,得到与预期相符的46 kDa蛋白。基因功能互补试验发现,重组菌能在以C12~C16为唯一碳源的培养基中生长。[结论]TY22菌株的烷烃羟化酶基因完整CDS序列全长1 236 bp,能氧化C12~C16的中长链烷烃,并能在大肠杆菌中有效表达。
【英文摘要】 [Objective] To clone and sequence the alkane hydroxylase gene alkB of a petroleum hydrocarbon degrading bacteria TY22,then to clone alkB into express vector for expressing and identifying its function.[Method]First,use PCR amplification to get partial sequence of 1236 bp alkB gene,then obtain the complete CDS sequence by chromosome walking techniques.Second,clone alkB gene into pET21b(+) vector,and transform the recombinant plasmid into E.coli BL21(DE3) for expressing.Third,clone alkB gene into pCom8 vector...
【基金】 四川省科技厅应用基础研究项目(2014JY0196); 四川省南充市科技局重点项目(16YFZJ0040)
【更新日期】 2018-01-26
【分类号】 X172
【正文快照】 石油是目前全世界最为重要的能源物质,但在石油开发过程中经常会产生事故性泄露,在石油制品的生产和使用过程中,也往往会造成大量石油污染物进入土壤、河流和大气而产生严重的环境污染[1~4]。据估计,全球每年有1×109t石油污染物泄漏或排放至周围环境中,对生态环境造成了极大的

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