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基因敲除质粒载体的构建及其在幽门螺杆菌基因敲除中的应用  
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【英文篇名】 Construction of a novel plasmid vector and its use to knock out genes in Helicobacter pylori
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【作者】 季晓飞; 赵慧琳; 张莹; 柏雪莲; 张艳丽; 荣倩玉; 李波清;
【英文作者】 JI Xiao-fei; ZHAO Hui-lin; ZHANG Ying; BAI Xue-lian; ZHANG Yan-li; Rong Qian-yu; LI Bo- qing; Department of Pathogen Biology; Binzhou Medical University;
【作者单位】 滨州医学院病原生物学教研室;
【文献出处】 中国病原生物学杂志 , Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱 2016年 12期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 幽门螺杆菌; 基因敲除; 质粒; 同源重组;
【英文关键词】 Helicobacter pylori; gene knockout; plasmid; genetic recombination;
【摘要】 目的构建用于幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)同源重组双交换基因敲除的质粒载体,实现Hp内基因的快速敲除。方法以质粒pLYL03为骨架,重新排列质粒上的基因元件以减少冗余序列,用卡那霉素抗性基因(aphA)替换原质粒上的红霉素抗性基因作为抗性筛选标记,在抗性筛选标记两端构建多克隆位点用于同源重组同源臂的插入,由此构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK。以质粒pSJHK为载体构建hp0169基因的同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,通过电击转化方法将敲除质粒pSJHK-0169转入Hp中,用卡那霉素筛选转化子。结果以质粒pLYL03为基础构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK,大小4 371bp。以基因hp0169作为目标基因构建同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,经电击转化Hp中,获得卡那霉素抗性阳性转化子,测序确证基因敲除成功。结论构建的基因敲除质粒载体pSJHK实现了对Hp中目标基因的敲除,为Hp新基因功能研究和致病因子的发掘提供了有效的基因操作工具。
【英文摘要】 Objective To construct a novel plasmid vector to facilitate the knocking out of genes in Helicobacter pylori. Methods pLYL03 was selected as a backbone for plasmid construction.Genetic elements of the pLYL03 plasmid were rearranged and redundant sequences were removed.The antibiotic resistance gene of pLYL03 was replaced with aphA to generate the kanamycin-resistant plasmid pSJHK.The plasmid pSJHK was used as the template plasmid for generating a double-cross-over recombination gene-knockout plasmid,and the...
【基金】 国家自然科学基金青年基金项目(No.81471561,81501718); 山东省自然科学基金培养基金项目(No.ZR2015PC021,ZR2014CP020); 滨州医学院科技计划项目(No.BY2014KJ01);滨州医学院校级科研启动基金项目(No.BY2014KYQD10,BY2014KYQD11)
【更新日期】 2017-02-23
【分类号】 R378
【正文快照】 ***幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种特异性寄生于人胃黏膜的革兰阴性微需氧菌。研究表明,Hp感染是慢性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡等胃肠道疾病发生的重要病因,并与胃癌、胃粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的发生密切相关[1-3]。1994年,世界卫生组织国际癌症研究机构

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