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阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克隆、表达及鉴定  
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【英文篇名】 One-step cloning,expression,and detection of Trichomonas vaginalis RRas cDNA
【下载频次】 ★★★★☆
【作者】 王文柯; 贾鑫; 曹磊; 王黎; 薛长贵;
【英文作者】 WANG Wen-ke; JIA Xin; CAO lei; WANG Li; XUE Chang-gui; Department of Parasitology; Basic Medical College of Zhenzhou University;
【作者单位】 郑州大学基础医学院人体寄生虫学教研室;
【文献出处】 中国病原生物学杂志 , Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱 2016年 11期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 阴道毛滴虫; RRas基因; 一步克隆; 原核表达; Western blot;
【英文关键词】 Trichomonas vaginalis; RRas gene; one-step cloning; prokaryotic expression; Western blotting;
【摘要】 目的一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能。方法用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导。表达产物用NiAgarose His纯化试剂盒纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定和Western blot分析。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的RRas基因片段长617bp,酶切及DNA测序证实RRas-PQE-80L重组质粒构建正确。表达的融合蛋白分子质量单位约为23.6ku,该蛋白能被抗His标签抗体识别。结论成功构建重组原核表达质粒RRas-PQE-80L载体,并能在E.coli BL21中表达,表达蛋白具有反应原性。
【英文摘要】 Objective To clone,express,and identify the RRas gene of Trichomonas vaginalis in order to further study its location and functions in tissues and cells. Methods A cDNA fragment of T.vaginalis RRas was amplified with PCR.In one step,the fragment was cloned into a PQE-80 LEasy vector.Clones with the PQE-80L/T.vaginalis RRas gene were identified with PCR and restriction enzyme digestion and then sequenced.E.coli BL21 cells were transformed with the recombinant plasmid.IPTG was used to induce expression of the...
【更新日期】 2016-12-08
【分类号】 R382.2
【正文快照】 *?Ras基因作为一种从肿瘤细胞中分离的转化基因,表达的RAS蛋白具有小GTP酶的活性,调节细胞的生长、增殖和分化。RAS相关GTP酶具有传达细胞外信号至效应细胞的功能,具有激活与失活两种活性状态,前者与GTP结合,后者与GDP结合,是GT-Pase的开关蛋白。RAS信号通路RAF/MEK/ERKh和PI3K

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