目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用。利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建Hp Hsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸。结果构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238。结论 Hp ...
【英文摘要】
Objective To detect and analyze the interaction between Hsp60 and UreB to substantiate the contention that Hsp60 acts as a chaperone of UreB in Helicobacter pylori. Methods The UreB gene from H.pylori strain 26695 was tagged with GST and the Hsp60 gene was tagged with His,and the two genes were cloned.GST-tagged UreB and Histagged Hsp60 were expressed in E.coli,and the two recombinant proteins were purified using affinity chromatography.Then the interaction between two proteins was analyzed using apull-down...
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