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一株鼠毒素基因缺失突变鼠疫耶尔森氏菌株的构建和鉴定  
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【英文篇名】 Construction and identification of a murine toxin deletion mutant of Yersinia pestis
【下载频次】 ★★☆
【作者】 何建; 靳娟; 张青雯; 赵海红; 辛有全; 杨晓艳; 戴瑞霞; 王梅; 金泳; 蒲光兰; 冯建萍; 祁芝珍;
【英文作者】 HE Jian; JIN Juan; ZHANG Qing-wen; ZHAO Hai-hong; XIN You-quan; YANG Xiao-yan; DAI Rui-xia; WANG Mei; JIN Yong; PU Guang-lan; FENG Jian-ping; QI Zhi-zhen; Qinghai Institute for Endemic Disease Prevention and Control; Key Laboratory for Plague Prevention and Control of Qinghai Province; Department for Endemic Disease Prevention and Control;
【作者单位】 青海省地方病预防控制所青海省鼠疫防控与研究重点实验室; 青海省地方病预防控制所地方病预防控制科;
【文献出处】 中国病原生物学杂志 , Journal of Pathogen Biology, 编辑部邮箱 2016年 06期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 鼠疫耶尔森氏杆菌; 鼠毒素; 基因敲除;
【英文关键词】 Yersinia pestis; murine toxin; gene knockout;
【摘要】 目的构建鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株鼠毒素基因缺失的突变菌株,建立鼠疫耶尔森氏杆菌的基因敲除方法,为研究鼠疫耶尔森氏杆菌基因奠定基础。方法选择1株鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株(菌株号为0614F)为实验菌株。利用Artemis软件阅读鼠疫菌91001株基因序列,查找并导出鼠毒素(Ymt)及其两侧100个基因序列。设计同源区突变盒引物和鉴定引物,采用λ-Red系统一步法敲除0614F鼠毒素编码基因并进行鉴定。结果质粒提取试剂盒提取Escherichia coli DH5α培养物pKD46质粒50μl,浓度为121.1ng/μl;同源区突变盒引物扩增含有氯霉素抗性基因菌株DNA,PCR产物进行1%琼脂糖电泳凝胶电泳鉴定后切胶,用胶回收试剂盒提取氯霉素线性突变盒50μl,浓度为724ng/μl;0614F菌株经两次电转化获得具有氨苄青霉素和氯霉素抗性的菌株,用相应鉴定引物进行PCR鉴定,获得菌株鉴定为鼠毒素基因缺失株0614F-△Ymt。结论应用基因敲除技术对鼠疫耶尔森氏杆菌鼠毒素基因定向突变成功,为青藏高原型鼠疫菌株新型疫苗研究奠定了实验基础。
【英文摘要】 Objectives To construct a murine toxin deletion mutant of Yersinia pestis and to establish a method of knocking out Y.pestis genes to lay the foundation for the study of the genes of Y.pestis. Methods An attenuated vaccine strain(0614F)was used as the experimental strain.A pair of PCR primers was designed to amplify chloramphenicol resistance genes.The software Artemis was used to read the gene sequences of 91,001 strains to identify toxin genes of Y.pestis with homologous arms.λ-red based mutagenesis was u...
【基金】 青海省自然科学基金项目(No.2013-Z-906)
【更新日期】 2016-08-16
【分类号】 R378.61
【正文快照】 *?**?青海省是全国甚至全球鼠疫的高发地,鼠疫自然疫源地长期存在且复杂而活跃,动物间鼠疫流行猛烈,时常波及人类,进入21世纪后的15年内就发生了人间鼠疫13起,发病37人,死亡16人,1954-2012***年分离的鼠疫菌中93.26%为强毒株[1]。青海地区鼠疫具有发病急、病程短、鼠疫菌的毒力

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