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【英文篇名】 |
Secretory expression and purification of avirulent diphtheria toxin mutant H21G protein |
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【下载频次】 |
★★☆ |
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【作者】 |
范锋锋;
李燕婷;
金鑫;
刘月萍;
吴朝今;
冯宜扬;
乔瑞洁;
许博;
赵志强;
谭小梅;
谢贵林; |
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【英文作者】 |
FAN Feng-feng;
LI Yan-ting;
JIN Xin;
LIU Yue-ping;
WU Zhao-jin;
FENG Yi-yang;
QIAO Rui-jie;
XU Bo;
ZHAO Zhi-qiang;
TAN Xiao-mei;
XIE Gui-lin;
Lanzhou Institute of Biological Products Co.;
Ltd.; |
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【作者单位】 |
兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心;
中国生物技术股份有限公司; |
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【文献出处】 |
中国生物制品学杂志
, Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱
2016年 12期
期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
白喉毒素;
无毒突变体H21G;
分泌性表达;
纯化; |
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【英文关键词】 |
Diphtheria toxin(DT);
Avirulent mutant H21G;
Secretory expression;
Purification; |
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【摘要】 |
目的原核分泌性表达白喉毒素无毒突变体H21G蛋白并进行纯化,为下一步开发以重组H21G蛋白为基础的疫苗奠定基础。方法以p ET16a-H21G质粒为模板,PCR扩增H21G基因,亚克隆至p ET22b载体中,构建重组原核表达质粒p ET22b-H21G,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组H21G蛋白分泌性表达。重组蛋白经渗透压休克,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Phenyl Sepharose 6FF(high sub)疏水层析纯化后,使用还原/非还原SDS-PAGE和HPLC法分析纯化蛋白的纯度,窄范围等电聚焦分析其等电点,MALDI-TOF质谱法分析其相对分子质量,N-末端测序法鉴定N-末端氨基酸序列。结果重组原核分泌性表达质粒p ET22b-H21G经双酶切(NcoⅠ和XhoⅠ)和测序证明构建正确;目标蛋白以可溶形式存在于宿主菌周质间隙,表达量为10%~15%;经纯化后,重组蛋白纯度达95%以上,等电点在4.55~6.20之间,相对分子质量和N-末端氨基酸序列均与白喉毒素相符合。结论成功分泌性表达并纯化了重组白喉毒素无毒突变体H21G蛋白,为下一步... |
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【英文摘要】 |
Objective To express avirulent diphtheria toxin(DT)mutant H21 G protein in a secretory form in prokaryotic cells, and lay a foundation of further development of H21G-based vaccine. Methods H21 G gene was amplified by PCR using plasmid p ET16a-H21 G as a template and subcloned to vector p ET22 b, and the constructed recombinant plasmid p ET22b-H21 G was transformed to competent E. coli BL21(DE3) for expression under induction of IPTG. The expressed protein was purified by osmotic shock treatment, DEAE Sephar... |
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【更新日期】 |
2016-12-26 |
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【分类号】 |
R378 |
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【正文快照】 |
白喉毒素(diphtheria toxin,DTx)为白喉杆菌(Cor-ynebacterium diphtheriae)被β噬菌体溶源化后,由β噬菌体上序列长度为1 605 bp的tox基因编码合成的外毒素[1]。DTx由535个氨基酸组成,相对分子质量58 300,可分为3个结构区:N-端为催化区,中间为穿膜区,C-端为受体结合区,3个区域 |
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