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埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备  
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【英文篇名】 Prokaryotic expression of surface specific antigen of echovirus 6and preparation of its polyclonal antibodies
【下载频次】 ★★
【作者】 李素梅; 齐永; 潘英; 李素芹; 李佳萌; 徐亭亭; 陈晨; 王新国; 徐艺菲; 李越希;
【英文作者】 LI Su-mei; QI Yong; PAN Ying; LI Su-qin; LI Jia-meng; XU Ting-ting; CHEN Chen; WANG Xin-guo; XU Yi-fei; LI Yue-xi; Department of Biochemistry and Molecular Biology; School of Basic Medicine; Nanjing Medical University;
【作者单位】 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系; 南京军区军事医学研究所; 中国药科大学生命科学与技术学院;
【文献出处】 中国生物制品学杂志 , Chinese Journal of Biologicals, 编辑部邮箱 2016年 04期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 埃可病毒6型; VP1蛋白; 原核细胞; 基因表达; 多克隆抗体;
【英文关键词】 Echovirus 6; VP1 protein; Prokaryotic cells; Gene expression; Polyclonal antibody;
【摘要】 目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均>90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1...
【英文摘要】 Objective To express the surface specific antigen VP1 of echovirus 6 in prokaryotic cells and prepare its polyclonal antibodies. Methods The fragments with strong antigenicity was screened from the amino acid sequence of VP1 protein, of which the sequences were optimized and inserted into expression vectors p GEX-4T-2 and p ET-28a(+)respectively. The constructed recombinant plasmids p GEX-4T-2-vp1 and p ET-28a-vp1 were identified by restriction analysis and sequencing, then transformed to E. coli BL21(DE3)f...
【基金】 国家传染病重大专项(2013ZX10004804-003)
【更新日期】 2016-04-20
【分类号】 R392-33
【正文快照】 人肠道致细胞病变孤儿病毒(enteric cytopatho-genichuman orphan virus,ECHO virus)简称埃可病毒,是一类单股正链RNA的肠道病毒,有34个血清型。埃可病毒分布于全球各地,在人群中广泛传播和流行[1],可通过呼吸道和消化道传播,其感染可引起多种人类疾病,其中无菌性脑膜炎最为常?

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