目的制备乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA定量检测室内质控品,并进行初步评价。方法对HBV各个基因型序列进行多序列比对分析,选择保守序列S区设计引物,PCR扩增HBV S区基因,与pEASY-T1载体连接,构建重组质粒。测序后,将重组质粒稀释成10~7 copies/ml、10~4 copies/ml两个水平,分别作为高值质控品(HBVH)和低值质控品(HBV-L),分装冷冻于-80℃,并初定靶值。评价自制质控品的精密度和稳定性,绘制室内质控图。结果构建的重组质粒测序结果与目的片段一致,自制HBV DNA 2个水平室内质控品的精密度、稳定性均达到实验要求。结论自制HBV DNA 2个水平的质控品可用于HBV DNA定量检测的室内质控。
【英文摘要】
Objective To prepare and preliminarily evaluate the internal quality control for quantitative determination of hepatitis B virus(HBV) DNA. Methods Multiple sequence alignment analysis was performed on HBV genotypes, and primers were designed based on the conserved region of HBV S gene for amplification by PCR. The PCR products were inserted into vector pEASY-T1, and the constructed recombinant plasmids were identified by sequencing, then diluted to concentrations of 10~7 and 10~4 copies / ml and used as hig...
【基金】
甘肃省科技支撑计划项目(090NKCA099)
【更新日期】
2016-02-25
【分类号】
R440
【正文快照】
在全球范围内,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染仍是严重威胁人类健康的一个主要公共卫生问题。据世界卫生组织估计,全球约有20亿人感染HBV,其中2.4亿人处于慢性感染状态[1]。因此,乙型肝炎的诊断和治疗显得非常重要。实时荧光定量PCR具有较高的敏感性和特异性,临床上?
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