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原核表达载体pET30a/ATRX-C_(2193-2492)的构建与诱导表达  
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【英文篇名】 Construction and inducible expression of prokaryotic expression vector pET30a/ATRX-C_(2193-2492)
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【作者】 唐双阳; 刘志敏; 李冉辉; 申海艳; 赵兰华; 蔡恒玲; 万艳平;
【英文作者】 Shuangyang Tang; Zhimin Liu; Ranhui Li; Haiyan Shen; Lanhua Zhao; Hengling Cai; Yanping Wan; Institute of Pathogenic Biology; University of South China; Hunan Provincial Key Laboratory for Special Pathogens Prevention and Control;
【作者单位】 南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室;
【文献出处】 生物技术 , Biotechnology, 编辑部邮箱 2016年 06期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 ATRX; 原核表达载体; 诱导表达; 蛋白;
【英文关键词】 ATRX; prokaryotic expression vector; induced expression; protein;
【摘要】 [目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_(2193-2492)基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体上,转化E.coli BL21感受态细胞,构建原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),经PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的质粒p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)转化,经IPTG诱导表达,利用镍离子亲和层析法纯化6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白。[结果]成功获得900 bp的ATRX-C_(2193-2492)基因片段并构建了原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),且该载体能在E.coli中诱导表达分子量约34 k Da蛋白产物。[结论]原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)能成功诱导表达分子量约34 k Da的ATRX-C_(2193-2492)蛋白,该蛋白纯化产物能为后续ATRX多克隆抗体的制备提供实验基础。
【英文摘要】 [Objective]To construct the prokaryotic expression vector of the ATRX-C terminal,for the preparation of its polyclonal antibody,so as to lay the ground for further explore the role of ATRX protein in cervical cancer caused by HPV16.[Methods]Using the IF-GFP-ATRX as template,ATRX-C_(2193-2492) gene was amplified by PCR and then cloned into prokaryotic expression vector p ET30a(+). The recombinant plasmid was transfected into E. coli BL21 competent cell,and identified by DNA sequencing,restriction enzyme dige...
【基金】 国家自然科学基金项目(“人乳头瘤病毒16型E2蛋白对Daxx调控细胞凋亡的影响”,No.81402169); 湖南省教育厅重点项目(“Daxx在ND10抗HPV16感染中的作用及机制研究”,No.15A164); 特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目(湘科计字[2014]5号); 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心资助项目(湘教通[2015]351号)
【更新日期】 2017-02-16
【分类号】 Q78;R737.33
【正文快照】 X连锁伴α地中海贫血的智力低下综合征(al-pha thalassemia/mental retardation syndrome X-linked,ATRX)是一种X连锁遗传的精神发育迟滞综合征。ATRX蛋白是一种染色质重构因子,具有ATP依赖性,为SWI2/SNF2蛋白家族成员,能够调控DNA的甲基化[1],参与DNA的修复、染色体的重组和转

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