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肺炎支原体铁吸收调节蛋白基因的克隆表达与纯化  
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【英文篇名】 Cloning,expression and purification of Fur from Mycoplasma pneumoniae in E. coli
【下载频次】 ★★★
【作者】 唐愈菲; 游晓星; 赵爽; 黄泽智; 李冉辉;
【英文作者】 Yufei Tang; Xiaoxing You; Shuang Zhao; Zezhi Huang; Ranhui Li; Shaoyang Medical College; Institution of Pathogenic Biology; Medical College; University of South China;
【作者单位】 邵阳医学高等专科学校; 南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室;
【文献出处】 生物技术 , Biotechnology, 编辑部邮箱 2016年 03期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 肺炎支原体; Fur蛋白; 克隆; 表达;
【英文关键词】 Mycoplasma pneumoniae; Fur; cloning; expression;
【摘要】 [目的]克隆肺炎支原体铁吸收调节蛋白(Fur)基因并纯化Fur蛋白,为研究其生物学功能奠定基础。[方法]利用Clustal Omega分析肺炎支原体Fur蛋白及其同源序列并用MEGA6.0构建进化树,通过PCR扩增Fur基因并对其进行双酶切,然后连接到p ET28a,得到重组载体p ET28a-Fur,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导Fur蛋白表达,并通过亲和层析纯化Fur蛋白。[结果]多序列比对和进化树分析表明Mp含有一个Fur蛋白。克隆得到大小为477 bp的Fur基因,编码159个氨基酸。得到重组表达质粒p ET28a-Fur,该质粒能在大肠杆菌中能高效表达,并纯化得到重组Fur蛋白。[结论]成功克隆获得Mp Fur基因,在大肠杆菌中高效表达并获得高纯度Fur蛋白。
【英文摘要】 [Objective]To clone Fur( Ferric uptake regulator protein) gene form Mycoplasma pneumoniae( Mp) and purify Fur protein. [Methods]The Mp Fur with its homologous proteins were analysed by Clustal Omega and the phylogenetic tree was constructed by MEGA6. 0. The Mp Fur was amplified by PCR and ligated p ET28 a vector to generate the p ET28a- Fur plasmid,which was transformed into E. coli BL21( DE3). The Fur protein was induced by IPTG and purified by Ni2 +- affinity chromatography. [Results]The results of sequen...
【基金】 湖南省科技计划项目(“次抑菌浓度的大环内酯药物诱导Mp交叉耐药的机制研究”;No.2013FJ3067); 特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目(湘科计字[2014]10号)
【更新日期】 2016-07-21
【分类号】 R378;Q78
【正文快照】 铁是细菌在生存和生长过程中必需的金属元素之一,它参与了细菌的电子传递、DNA合成和氧的运输等各种生理和生化过程[1]。但是细菌胞内高浓度的铁离子会导致细菌内的氧化失衡,细菌必须具备一定机制用来维持细菌体内的铁离子平衡[1-2]。铁吸收调节蛋白(ferric uptake regulator p

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