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【英文篇名】 |
Co-expression of multiple genes for the synthesis of trans-4-hydroxy-L-proline in Escherichia coli |
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【下载频次】 |
★★★★★ |
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【作者】 |
盛花开;
衣玉兰;
李志敏;
叶勤; |
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【英文作者】 |
Huakai Sheng;
Yulan Yi;
Zhimin Li;
Qin Ye;
State Key Laboratory of Bioreactor Engineering;
East China University of Science and Technology; |
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【作者单位】 |
华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室; |
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【文献出处】 |
生物技术
, Biotechnology, 编辑部邮箱
2016年 01期
期刊荣誉：ASPT来源刊 CJFD收录刊 |
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【中文关键词】 |
重组大肠杆菌;
重叠PCR;
无缝组装;
反式-4-羟基-L-脯氨酸; |
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【英文关键词】 |
recombinant E.coli;
overlap PCR;
seamless assembly;
Hyp; |
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【摘要】 |
[目的]得到表达多个基因的重组大肠杆菌,以期实现葡萄糖为碳源生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。[方法]以菌液为模板,PCR得到不同来源的proB、proA、proC、p4h基因,重叠PCR串联相邻基因,所得片段通过无缝组装与p ET-28a载体连接,并在大肠杆菌BL21中表达,筛选阳性表达菌株,电泳及测序验证,重组菌在30 ml MCG培养基摇瓶中发酵,分光光度法和HPLC检测产量。[结果]0.5 mmol/L IPTG诱导24 h,5组串联基因成功在大肠杆菌中表达,并以葡萄糖为碳源,获得产物反式-4-羟基-L-脯氨酸,培养基不添加L-脯氨酸时E.coli BL21/p ET-28a-BAHHbs、E.coli BL21/p ET-28a-HBACkp和E.coli BL21/p ET-28a-HBAmg产量达到0.28 g/L、0.16 g/L和0.29 g/L,添加4 mmol/L的L-脯氨酸时,分别为0.64 g/L、0.55 g/L和0.74 g/L。[结论]proB、proA、proC及p4h基因成功在大肠杆菌中表达,5株重组菌在30℃摇瓶中诱导表达24 h得到产物反式-4-羟基-L-脯氨酸,其中E.... |
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【英文摘要】 |
[Objective]Recombinant Escherichia coli BL21 strains was constructed and was expected to produce trans- 4- hydroxy- L- proline( Hyp) using glucose as substrate. [Methods]proB,proA,proC,p4 h genes was amplified by PCR with different bacterium solution as template. Overlap PCR was used to connect adjacent gene fragments,then cloned to p ET- 28 a by seamless assembly and transformed into E. coli BL21. Recombinant strains were cultivated in MCG shake flaks and production was detected by spectrophotometry and HP... |
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【更新日期】 |
2016-04-11 |
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【分类号】 |
Q78 |
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【正文快照】 |
反式-4-羟基-L-脯氨酸(Trans-4-hy-droxy-L-proline,Hyp),简称羟脯氨酸,是重要的前体物质,可用于药物[1]、化妆品[2]、饲料添加剂[3]等的合成。Hyp可从水解胶原蛋白中获得[4],但是该步骤复杂,而且会产生大量废物[5]。化学合成法底物利用率很低[6]。微生物中的脯氨酸羟化酶(prol |
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