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桃甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术体系的建立  
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【作者】 蔡志翔; 沈志军; 严娟; 马瑞娟; 俞明亮;
【作者单位】 江苏省农业科学院园艺研究所/江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室;
【文献出处】 江苏农业科学 , Jiangsu Agricultural Sciences, 编辑部邮箱 2016年 11期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 桃; DNA甲基化; MSAP; 体系优化;
【摘要】 为建立适合桃的甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,简称MSAP)反应体系,以桃PCM-1R、PCM-1G为材料,对MSAP技术中的关键因素进行优化。结果表明,500 ng基因组DNA用EcoRⅠ、HapⅡ或MspⅠ各10 U(0.5μL,2 000 U/m L),37℃保温12 h,即可酶切完全;25μL选择性扩增体系中,含有2μL10倍稀释的预扩增产物、各1μL上下游引物、2.5μL 10×Taq buffer、2.5μL d NTP mix(各0.2 mmol/L)、2.5μL25 mmol/L MgCl_2、0.25μL Taq DNA聚合酶。在该体系下选用256对引物对桃叶片进行甲基化模式分析,经筛选获得23对扩增条带清晰、重复性好的引物,PCM-1R、PCM-1G总甲基化率分别为28.0%、25.7%。
【基金】 国家自然科学基金(编号:31101517); 江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(12)5034]
【更新日期】 2017-03-29
【分类号】 S662.1
【正文快照】 DNA甲基化是真核细胞基因组主要的修饰方式之一,DNA甲基化特别是胞嘧啶甲基化具有表观遗传效应和突变效应,与基因表达调控、细胞分化、基因组印记、性染色体失活及细胞记忆等生物学过程密切相关[1-4]。1995年,Vos等首次将随机扩增多态性与限制性内切酶片段长度多态性2种分子标?

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