为了给酸乳生产企业提供一种快捷、简便、灵敏的葡糖杆菌的LAMP检测方法,本研究选取葡糖杆菌属的模式菌株氧化葡糖杆菌为代表菌株。根据Gen Bank中公布的氧化葡糖杆菌的16S r RNA(X73820)基因的强特异性序列设计四条引物,优化引物、Mg2+、温度等反应条件,建立了环介导等温扩增技术检测酸乳中葡糖杆菌的方法。对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并与PCR方法的灵敏度进行比较。结果显示,该组引物的特异性强,对反应产物进行酶切分析,酶切产物的片段与理论值相符;该LAMP方法检测纯菌的灵敏度为7.5×101 CFU/m L,是PCR检测方法的10倍;用纯菌液对酸奶进行人工污染,提取模拟变质酸奶的DNA进行LAMP扩增,其最低检出限为7.5×102 CFU/m L。综上所述,本研究建立的LAMP检测方法特异性强、灵敏度高,耗时短,实现了对葡糖杆菌的快速检测,在食品检测行业具有很好的应用前景。
【英文摘要】
Objective: The aim was to develop a rapid, simple, and sensitive LAMP method for the detection of Gluconobacter to be used in the yogurt industry. Method: Gluconobacter oxydans was selected as the type culture strain. Two pairs of LAMP primers targeting the 16 S r RNA(X73820)housekeeping gene of Gluconobacter available in Gen Bank were designed. Concentrations of the primers and Mg2+ and the temperature of the LAMP were optimized, and a rapid, sensitive LAMP assay for Gluconobacter detection was established...
【基金】
国家自然科学基金项目(31401584);
河北省食药局科技计划项目(PT2014030)
【更新日期】
2016-04-13
【分类号】
TS252.7
【正文快照】
葡糖杆菌属(Gluconobacter)是一类革兰氏阴性杆菌,极生鞭毛、绝对好氧,尚未发现对人及动物产生致病性,与人类生产生活关系密切。葡糖杆菌属的部分菌株在维生素C、米格列醇的工业生产合成等食品及医药方面具有重要应用[1~2],是醋酸菌科的核心菌属之一。醋酸菌科(Acietic acid ba